studieämnen
kvinnorna rekryterades från en fabrik i Cuernavaca, 89 km söder om Mexico City., Hemoglobinkoncentrationen hos alla kvinnor i fabriken bestämdes från finger-prick blodprov, följt av ett venöst blodprov för att bestämma serumferritin bland icke-anemiska kvinnor. Totalt rekryterades 20 icke-anemiska kvinnor med låga järnbutiker baserat på hemoglobinkoncentration 125 g/l och serumferritinkoncentration <25 µg/l. uteslutningskriterier inkluderade graviditet och amning, gastrointestinala eller metaboliska störningar (inflammatorisk tarmsjukdom, kronisk diarré, cystisk fibros), andra kroniska sjukdomar och de som tog järntillskott., Totalt rekryterades 20 uppenbarligen friska spädbarn (i åldern 6-24 månader) och 20 tydligen friska barn (i åldern 2-5 år) från mödrar med tillräckliga hemoglobinnivåer. Ämnena och barnens föräldrar var fullt informerade om Studiens mål och förfaranden, och skriftligt samtycke erhölls. Den Etiska Kommittén vid Instituto Nacional de Salud Pública, Cuernavaca, Mexiko och Swiss Federal Institute of Technology, Zürich, Schweiz granskat och godkänt protokollet.,
provstorlek
urvalsstorleksberäkningar baserades på interindividuella och intraindividuella variationer i järnabsorption såsom observerats i tidigare studier av järn biotillgänglighet hos spädbarn och småbarn (Davidsson et al., 1994, 1997, 2000, 2004). Det uppskattades att 20 barn skulle vara en minsta provstorlek för att detektera en 50% signifikant skillnad i log Genomsnittlig järnabsorption från en aritmetisk Genomsnittlig järnabsorption vid baslinjen på 7%, med 90% effekt, en signifikansnivå på 0, 05 (oparad t-test) och en felfrekvens av typ i på 5%., Föregripa en avhopp på 10%, dessa uppskattningar visade att minst 20 personer i varje grupp skulle krävas för att slutföra studierna.
studiedesign
kvinnor, spädbarn och barn tilldelades slumpmässigt för att ta emot testmåltiden antingen med järnsulfat eller med järnfumarat på varandra följande dagar. Testmåltiden administrerades som frukost efter en natt snabb. Acceptans av testmåltiden bekräftades med varje spädbarn och barn före inskrivning i studien. Ingen mat eller dryck var tillåten för 3 h efter fullständigt intag av den märkta måltiden., Spädbarn och barn stod under noggrann övervakning under och efter intaget av testmåltider.
totalt drogs 5 ml venöst blod i EDTA-behandlade rör strax före intag av den första testmåltiden och igen 14 dagar senare. Blodprover analyserades för järnstatusindikatorer (hemoglobin och serumferritin) och järn isotopkomposition. Kroppsvikt och höjd mättes vid varje blodprovstagning.
testmåltid
testmåltiden var en sötad majsmjölkdryck baserad på den lokala mexikanska majsmjölgrötdrinken ”atole”. Det gjordes från degergerat majsmjöl (24.,7%), helmjölkspulver (11,7%), ”piloncillo” (en fast form av oraffinerat farinsocker; 63,5%) och renat vatten (200 ml) utan tillsatt järn eller askorbinsyra. Standardiserade testmåltider bereddes speciellt för studien från lokalt tillgängliga livsmedel som köptes i bulk, förutom det degermed majsmjöl som inte var tillgängligt i Mexiko och erhölls från Schweiz (Swiss Mill, Zürich, Schweiz). Degermed majsmjöl användes för att minimera fytinsyrahalten i mjölet, vilket annars skulle minska biotillgängligheten av järn från testmjöl (Hurrell et al., 2002)., Testmåltiden kokades i en köksanläggning och transporterades varm till matningscentret på fabriken, där en servering på 220 g per kvinna och 60 g per spädbarn och barn bereddes som frukost och följdes av vattenintaget. Alla testmåltider var identiska med undantag för tillsats av antingen 4 mg Fe (kvinnor) eller 2, 5 mg Fe (spädbarn och barn) som antingen-järnfumarat eller-järnsulfat, som tillsattes till testmåltiden omedelbart före servering. Ferrofumaratpulver tillsattes direkt i testmåltiden och järnsulfat tillsattes som en lösning.,
stabila isotopetiketter
Isotopmärkt-järnfumarat producerades av Dr Paul Lohmann GmbH (Emmerthal, Tyskland) från anrikat elementärt järn med hjälp av ett nedskalat förfarande för deras motsvarande kommersiella tillverkningsprocess. Samma förfarande har använts för tidigare studier (Davidsson et al., 2000, 2001, 2002; Fidler m.fl., 2003; Sarker m.fl., 2004). Individuella ferrofumaratdoser förvägdes i polyetenrör, varvid den exakta mängd som tillsattes bestämdes med rörvikt och därefter lagrades., – järnsulfat framställdes från isotopiskt berikat elementärt järn (Chemgas, Boulogne, Frankrike), som löstes i 0,1 mol H2SO4/l och består av lämplig koncentration. Lösningen hölls under argonatmosfär i en polyetenflaska tills den behövdes och vägdes i individuella doser före utfodring.,
den isotopiska sammansättningen av båda etiketterna mättes i tre exemplar genom negativ termisk jonisering masspektrometri med hjälp av en magnetfält fältmasspektrometer (MAT262; Finnigan MAT, Bremen, Tyskland) utrustad med en multi-collector system av Faraday koppar för jondetektering. Järnkoncentrationen för varje etikett mättes i tre exemplar genom omvänd isotop utspädningsanalys (Walczyk, 1997). Ferrofumarat upplöstes i koncentrerad salpetersyra före isotoputspädning., Järnstandarden för naturlig isotopkomposition framställdes gravimetriskt från ett isotopreferensmaterial (IRMM-014; E. U. Institute of Reference Materials and Measurements, Geel, belgien). Isotopförhållanden mättes med negativ termisk joniseringsmasspektrometri (Walczyk, 1997).
Isotopsammansättning av blodprover
berikade helblodsprover mineraliserades genom mikrovågsförtunning med användning av en blandning av koncentrerade HNO3 och H2O2 (30%) som oxidationsmedel., Järn separerades från matrisen genom anjonbyteskromatografi och ett vätskeutvinningssteg i dietyleter (Walczyk et al., 1997). Kemiska ämnen behandlades under hela förfarandet. Isotopsammansättning av separerat järn mättes genom negativ termisk joniseringsmasspektrometri.
järnstatus
Nydragna helblodprover alikvoterades för mätning av hemoglobinkoncentration med hjälp av en bärbar HemoCue fotometer (Hemocue Inc., Angelholm, Sverige) och standardiserade tekniker., Motsvarande kvalitetskontrollmaterial analyserades i början av varje provtagningsdag (Hemocue Inc., Angelholm, Sverige). En alikvot av helblod separerades för serumferritinmätningar genom automatiserad immunanalys (Immulite One; DPC, Los Angeles, CA, USA) vid ETH, Zürich, och det återstående helblodet frystes för senare analys av isotopsammansättning.,
beräkning av järnabsorption
mängden 57Fe-och 58Fe-isotopmärken i blod, 14 dagar efter administrering, beräknades utifrån skiftet av Fe-isotopförhållanden och den uppskattade mängden cirkulerande järn i kroppen. Beräkningarna baserades på principerna för isotoputspädning, med hänsyn till att järnisotopmärkena inte var monoisotopiska. Cirkulerande järn beräknades baserat på blodvolym och hemoglobinkoncentration. Blodvolymberäkningar baserades på kroppsvikt och höjd enligt Brown et al. (1962) för kvinnor och Linderkamp et al., (1977) för barn. För beräkningar av fraktionerad järnabsorption antogs 80% införlivande av det absorberade järnet i erytrocyter för kvinnor (Hosein et al., 1967) och 90% för barnen (9). RBV av järnfumarat beräknades för varje uppsättning data.
statistisk analys
fraktionerade järnabsorptionsvärden presenteras som geometriska medelvärden och S.D. alla statistiska tester drevs på 80% och utfördes med 95% konfidensintervall på de log-transformerade data, eftersom järnabsorptionsvärdena normalt inte distribueras., Studentens Parade t-test användes för att jämföra data inom varje åldersgrupp. RBV av järnfumarat mellan åldersgrupper jämfördes med hjälp av studentens oparade t-test. Statistisk kraftanalys utfördes med hjälp av kommersiell programvara (StatMate 2; GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Linjär regression användes för att utvärdera förhållandet mellan järnabsorption och järnbutiker (representerat av serumferritin) och Pearsons korrelation användes för att undersöka förhållandet mellan serumferritin och RBV.