ORIGINAL RESEARCH
Serum B2-microglobulin values among healthy Brazilians using a DPC IMMULITE® assay
Valores de B2-microglobulina em brasileiros saudáveis usando o sistema automatizado DPC IMMULITE®
Fabíola branco Filippin; liliete Canes Souza
Department of clinical analysis, science and health center, Federal University of Santa Catarina – Florianópolis/SC, Brazil. E-mail: liliete @ ccs.ufsc.,objetivo: o presente estudo foi projetado para determinar o intervalo normal dos níveis séricos de beta 2-microglobulina (Sb2M) entre voluntários saudáveis no Brasil. Os níveis de Sb2M estão elevados em doentes infectados pelo vírus da Imunodeficiência Humana (VIH) e demonstraram ser o melhor preditor do Estado de infecção pelo VIH e de algumas doenças malignas, especialmente mieloma múltiplo., Para atingir o seu melhor uso no diagnóstico clínico brasileiro, foi realizado um estudo de intervalo de referência adequado para o ensaio SB2M IMMULITE®, com base no facto de os limites da sua gama de referência terem sido avaliados entre as populações europeias. métodos :noventa e seis dadores saudáveis de sangue foram avaliados, e os níveis de Sb2M foram medidos pelo imunoensaio quimioluminescente da enzima usando o analisador automático IMULITE®.
RESULTADOS: A faixa normal de Sb2M valores, estabelecida por um método estatístico não paramétrico, foi de 1,05 para 3,9 mg/mL, com o limite superior, sendo maior do que o relatado em outros lugares.,
CONCLUSÕES: Este estudo apresentou novos dados indicando que há uma diferença significativa entre a corrente de referência de limites para Sb2M IMMULITE® ensaio e os encontrados no Brasil, fornecendo evidências de diferenças significativas no intervalo de valores normais podem ocorrer entre diferentes populações, e que estes novos valores devem ser considerados para indivíduos Brasileiros.palavras-chave: b2-microglobulina. Intervalo de referência. Imunoensaio quimioluminescente. Voluntários saudáveis. Valor prognóstico.,
RESUMO
OBJETIVO: O objetivo do presente estudo foi determinar valores de referência de b2-Microglobulina sérica (Sb2M) em voluntários saudáveis. Sabe-se que tal parâmetro apresenta-se elevado em pacientes infectados com o vírus da imunodeficiência humana (HIV) e tem se mostrado melhor marcador da infecção por HIV e de desordens malignas, especialmente mieloma múltiplo., De forma a se obter o melhor diagnóstico clínico, um intervalo de referência adequado de Sb2M para a população brasileira foi determinado empregando-se o ensaio IMMULITE®; já que este tem como parâmetro uma faixa de referência determinada a partir de populações européias.
MÉTODOS: Noventa e seis doadores de sangue saudáveis foram avaliados e os valores de Sb2M foram medidos por método enzima imunoensaio quimiluminescente usando analisador automatizado IMMULITE®.
RESULTADOS: Os valores de Sb2M, estabelecidos por método estatístico não paramétrico, apresentaram-se entre 1.05 e 3.,9 mg/ml, sendo que o limite superior obtido foi maior que o relatado em outros trabalhos.
CONCLUSÃO: Este estudo apresentou novos valores, indicando que existe uma diferença significante entre os limites de referência de Sb2M disponibilizados para o IMMULITE® e os encontrados no presente trabalho, evidenciando a ocorrência de variações importantes entre diferentes populações e que novos valores devem ser considerados para brasileiros.
Unitermos: b2microglobulina. Intervalo de referência. Imunoensaio quimiluminescente. Voluntários saudáveis. Valor prognóstico.,
Beta 2-microglobulina (b2M) uma proteína encontrada em todas as células nucleadas, está associada a antigénios da classe 1 de histocompatibilidade nas membranas da superfície celular (particularmente abundantes em linfócitos e monócitos).Foi descoberto pela primeira vez na urina de doentes com insuficiência renal.Devido ao seu baixo peso molecular (11 800 daltons), 95% de todos os B2M livres no plasma são eliminados por filtração glomerular, e 99,9% são absorvidos por células tubulares proximais. Na presença de uma taxa de filtração renal normal, níveis séricos elevados de B2M (Sb2M) indicam uma produção elevada de b2M ou release3., Após a ativação do sistema imunológico, tanto os linfócitos B como T liberam ativamente b2M para a circulação de onde é posteriormente eliminado por filtração glomerular e reabsorção tubular.4 Aumento Sb2M concentrações têm sido encontrados em pacientes com células de sangue de dyscrasias, incluindo mieloma múltiplo,5,6 perturbações linfoproliferativas malignas,7 distúrbios mieloproliferativos 8 certas infecções virais, tais como o HIV infection9, citomegalovírus, não-A e não-B da hepatite, e mononucleose infecciosa.,O nível de Sb2M é também utilizado como um factor de prognóstico importante em doentes com mieloma múltiplo 5,6 e infecções por VIH.9
o intervalo de referência normal para Sb2M em indivíduos saudáveis encontrados na literatura foi determinado utilizando populações norte-americanas e europeias (ensaio DPC Immulite®). Numa tentativa de determinar a gama normal de níveis de Sb2M entre indivíduos assintomáticos seronegativos africanos, Piwowar et al. (1995)10 constatou que 50% destes indivíduos apresentavam valores anormais (valores médios de 2, 35 mg/mL). Num outro estudo, o valor médio de Sb2M entre voluntários saudáveis foi de 1, 36 mg/mL.,11 Neste relatório, descrevemos os valores Sb2M em indivíduos brasileiros saudáveis de um grupo de doadores de sangue no centro de Hematologia e Hemoterapia de Santa Catarina (HEMOSC).foram incluídos no estudo indivíduos dadores de sangue, homens e mulheres não grávidas com idades compreendidas entre os 25 e os 50 anos. Todos os indivíduos foram submetidos a uma avaliação clínica avaliada por HEMOSC, incluindo questionários e testes laboratoriais de rastreio de acordo com critérios legais brasileiros. Todos os voluntários que cumpriam estes critérios deram consentimento verbal e por escrito para que fossem extraídos 5 mL de sangue para o efeito do estudo., O protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê de Ética do Hospital Universitário de Florianópolis, Universidade Federal de Santa Catarina.os métodos
O sangue total foi colhido com um sistema de Vacutainer em tubos secos de 10 mL e o soro foi separado por centrifugação. A fim de eliminar os componentes lipídicos, as amostras de soro foram ultracentrifugadas a 18000 g durante 20 minutos. Todas as amostras de sangue foram obtidas entre as 14h e as 18h e foram processadas dentro de 5h após a venopunctura., As amostras foram previamente diluídas de 1 em 41 no diluente de amostra b2M (IMMULITE® Beta2 microglobulina kit, CPD, EUA) de acordo com as instruções do fabricante, tendo sido necessários 5 mL para o procedimento de ensaio. O Sb2M foi medido por um imunoensaio quimioluminescente em fase sólida de 2 locais utilizando o analisador automatizado IMMULITE® (DPC, Los Angeles, EUA).
análise estatística
no estudo do intervalo de referência para o doseamento de DPC IMMULITE®, o valor médio foi de 1, 26 mg / mL., O National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) aborda a utilização de critérios de exclusão a priori e a posteriori para obter amostras saudáveis.Portanto, todos os indivíduos com valores de Sb2M superiores a 2, 0 mg/mL foram reavaliados clinicamente para aceitação de valores para garantir que cada indivíduo era “saudável”. Os dados foram introduzidos e analisados com o Software Microsoft Excel. Foram calculados os valores médio e padrão de desvio. Os intervalos de referência do percentil 95 foram determinados utilizando percentis 2,5 e 97,5., De acordo com o procedimento recomendado pelo NCCLS, as observações foram classificados de acordo com o tamanho, e os 2,5 e 97,5 percentis foram obtidos como a 0.025 (n + 1) e 0.975 (n + 1) ordenar as observações, respectivamente (n= tamanho da amostra). Se os valores de base estimados não fossem inteiros, foi realizada uma interpolação linear.Foram incluídos no estudo os resultados de noventa e seis dadores brasileiros de sangue, 60 homens e 36 mulheres, com idade média (ano) de 33 anos. Os valores de Sb2M variaram entre 1, 05 e 3, 9 mg/mL, como demonstrado na Figura 1, e a média foi de 2, 46 mg/mL (desvio-padrão = 0, 73)., Assim, utilizando o percentil 97, 5 de acordo com um método não paramétrico de rotina, 12 3, 9 mg/mL foi considerado o limite normal Superior. O intervalo estabelecido foi de 1, 33, 9 mg/mL.pesquisadores em todo o mundo relataram a utilidade de Sb2M como um criador confiável na avaliação da progressão da infecção pelo HIV e mieloma múltiplo.5-8,10,13 em indivíduos infectados pelo VIH, o Sb2M parece ser um melhor indicador do Estado de infecção pelo VIH do que as contagens CD4 e também um melhor indicador da sobrevivência, estando o aumento dos níveis de Sb2M associado à progressão da doença.,Em doentes com mieloma múltiplo foi notificado aumento da produção e consequente libertação de Sb2M em fluidos corporais. A importância destes dados para os clínicos é baseada no fato de que as células plasmáticas de mieloma produzem Sb2M. portanto, assume-se que os valores de Sb2M podem indicar não só o tamanho, mas também a atividade proliferativa das células do mieloma13 e podem ser aceitos como um criador não específico da massa tumoral.5,6,13,14 além disso,o papel prognóstico do Sb2M em outras desordens proliferativas foi confirmado por muitos autores,7,14, 15 facilitando a avaliação clínica.,Por outro lado, foi notificado que, em doentes com baixa taxa de filtração glomerular, os níveis de Sb2M foram aumentados e os resultados laboratoriais devem ser interpretados com precaução.Os intervalos de Referência de 6,7,13
são utilizados clinicamente, juntamente com informação adicional, como orientações relativas ao estado do doente. O intervalo de referência de estudo para IMMULITE® Sb2M (1.01.7 mg/mL, com média de 1,26 mg/mL) definido pelo fabricante foi determinada usando-se amostras de soro de quase 800 voluntários adultos, incluindo homens e nonpregnant mulheres, variando de 20 a 70 anos de idade., Os temas foram selecionados com base em questionários. As amostras foram coletadas na França, Alemanha, Holanda e Portugal, e os valores obtidos foram analisados não parametricamente. O limite superior sugerido foi de 1, 7 mg/mL. Esses valores podem não ser representativos para os brasileiros. Na ausência de limites de referência adequados para Sb2M derivados de qualquer população brasileira, muitos investigadores têm utilizado dados obtidos de indivíduos norte-americanos e europeus que apresentaram limites superiores 2,3 vezes inferiores aos obtidos no presente estudo.,
o NCCLS recomenda que sejam utilizados intervalos de referência não paramétricos e que o tamanho da amostra, n, seja constituído por, pelo menos, 120 valores, a fim de calcular um intervalo de referência de 95%, 2,5% e 97,5% pontos da distribuição12. Este número é o número mínimo de valores necessários para a construção dos intervalos de confiança, fornecendo informações sobre a exactidão dos limites de referência calculados.neste estudo foram avaliadas 96 amostras., O nosso objectivo não era produzir novos intervalos de referência, mas sim concentrar mais a atenção na necessidade de cada laboratório produzir os seus próprios intervalos de referência para todos os parâmetros, apesar de muitas dificuldades, incluindo as práticas e despesas elevadas.
O presente estudo indica que podem ocorrer intervalos significativamente diferentes de valores de Sb2M entre diferentes populações, sugerindo que cada laboratório brasileiro deve estabelecer seus próprios limites de referência.,agradecemos ao centro de Hematologia e Hemoterapia de Santa Catarina e ao laboratório de análise clínica, Hospital Universitário de Florianópolis pelas amostras e assistência técnica. Estamos gratos ao CPD IMMULITE® por fornecer o reagente colocado gratuitamente para este estudo e ao Dr. Joanita Del Moral da Divisão de Hematologia, Hospital Universitário de Florianópolis.2. Berggard I& Bearn AG. Isolamento e propriedades de uma beta-2-globulina de baixo peso molecular que ocorre em fluidos biológicos humanos., J Biol Chem 1968; 243 (15):4095-103. 6. Greipp PR, Katzman JA, O’Fallon WM, Kyle RA. Valor do nível de beta-2-microglobulina e índices de rotulagem das células plasmáticas como factores de prognóstico em doentes com mieloma recentemente diagnosticado. Blood 1988; 72 (1): 219-23. 7. Constantines IP, Pathouli C, Karvountzis G, Papadopoulos, P, Varvoutsi-Constantinides M, Eliakis P, et al. Microglobulina beta 2 sérica em doenças linfoproliferativas malignas. Cancer 1985; 15 (10):2384-89. 8. Rodriguez J, Cortes J, Talpaz M, O’Brien S, Smith TL, Rios MB, et al., Os níveis séricos de beta-2 microglobulina são um factor de prognóstico significativo na leucemia mielóide crónica chomossoma positivo na Filadélfia. Clin Cancer Res 2000; 6: 147-52. 10. Cooper e, Forbes M & Hammbling M. soro beta 2-microglobulina e proteína C reactiva em infecções virais. J Clin Pathol 1985; 37: 1140-3. 11. Diamondstone LS, Tollerud DJ, Fuchs D, Wachter H, Brown LM, Maloney E, et al. Factores que influenciam os níveis séricos de neopterina e de beta-2-microglobulina numa população saudável e diversa. J Clin Immunol 1994;14 (6): 368-74. 12., National Committee for Clinical Laboratory Standards. Como definir e determinar os intervalos de referência no laboratório clínico: directriz aprovada, documento NCCLS C28-A E C28-A2, Villanova, PA, 1995, 2001, NCCLS.