ORIGINELE ONDERZOEK
Serum b2-microglobuline waarden bij gezonde Brazilianen met behulp van een DPC IMMULITE® assay
de Waarden van b2-microglobuline em brasileiros saudáveis of met behulp van geautomatiseerde systeem DPC IMMULITE®
Fabíola Branco Filippin; Liliete Stokken Souza
Afdeling Klinische Analyse, Science en Health Center, universidade Federal de Santa Catarina – Florianópolis/SC, Brazilië. E-mail: [email protected].,br
ABSTRACT
doel: deze studie was bedoeld om de normale waarden van bèta-2-microglobuline (sb2m) in serum bij gezonde vrijwilligers in Brazilië te bepalen. Sb2m-spiegels zijn verhoogd bij patiënten met een infectie met het humaan immunodeficiëntievirus (HIV) en zijn de beste voorspeller van de HIV-infectiestatus en van sommige kwaadaardige aandoeningen, met name multipel myeloom., Om het optimale gebruik ervan in de Braziliaanse klinische diagnose te bereiken, werd een adequaat referentieintervalonderzoek uitgevoerd voor de sb2m IMMULITE® assay, gebaseerd op het feit dat de grenzen van het referentiebereik werden geëvalueerd bij Europese populaties.
methoden: zesennegentig gezonde bloeddonoren werden geëvalueerd, en sb2m-spiegels werden gemeten door middel van chemiluminescent enzyme immunoassay met behulp van de IMMULITE® automated analyzer.
resultaten: een normaal bereik van Sb2M-waarden, vastgesteld met een niet-parametrische statistische methode, was 1,05 tot 3,9 mg / mL, waarbij de bovengrens hoger was dan elders gerapporteerd., conclusies: deze studie leverde nieuwe gegevens op die erop wijzen dat er een significant verschil is tussen de huidige referentiegrenzen voor de sb2m IMMULITE® assay en die welke in Brazilië zijn gevonden, waaruit blijkt dat er significante verschillen kunnen optreden in het bereik van normale waarden tussen verschillende populaties, en dat deze nieuwe waarden voor Braziliaanse individuen in overweging moeten worden genomen.
trefwoorden: b2-microglobuline. Referentie-interval. Chemiluminescente immunoassay. Gezonde vrijwilligers. Prognostische waarde.,
abstract
doelstelling: het doel van deze studie was het bepalen van de uitgangswaarden van serum B2-microglobuline (Sb2M) bij gezonde vrijwilligers. Het is bekend dat deze parameter hoog is bij patiënten die zijn geïnfecteerd met het humaan immunodeficiëntievirus (HIV) en dat is aangetoond dat het een betere marker is voor HIV-infectie en kwaadaardige aandoeningen, met name multipel myeloom., Om de beste klinische diagnose te verkrijgen, werd een adequaat referentiebereik van Sb2M voor de Braziliaanse populatie bepaald met behulp van de immulite® assay; aangezien dit als parameter een referentiebereik heeft bepaald voor Europese populaties.
methoden: zesennegentig gezonde bloeddonoren werden geëvalueerd en Sb2M-waarden werden gemeten met behulp van de chemiluminescent enzyme immunoassay methode met behulp van IMMULITE®automated analyzer.
resultaten: de waarden van Sb2M, vastgesteld door niet-parametrische statistische methode, lagen tussen 1,05 en 3.,De verkregen bovengrens was hoger dan die welke in andere studies werd gerapporteerd. conclusie: in dit onderzoek werden nieuwe waarden gepresenteerd, waaruit blijkt dat er een significant verschil is tussen de voor IMMULITE® beschikbare referentiegrenswaarden voor Sb2M en die welke in dit onderzoek zijn gevonden, waaruit blijkt dat er belangrijke verschillen zijn tussen verschillende populaties en dat nieuwe waarden in overweging moeten worden genomen voor Brazilianen.
eenheden: B2-microglobuline. Referentiebereik. Chemiluminescente immunoassay. Gezonde vrijwilligers. Prognostische waarde.,
bèta-2-microglobuline (b2M) een eiwit dat in alle kerncellen voorkomt, wordt geassocieerd met histocompatibiliteitsklasse 1-antigenen op celoppervlaktemembranen (in het bijzonder overvloedig op lymfocyten en monocyten).1 Het werd voor het eerst ontdekt in de urine van patiënten met nierfalen.2 vanwege het lage molecuulgewicht (11.800 Dalton) wordt 95% van alle vrije b2M in plasma geëlimineerd door glomerulaire filtratie, en 99,9% daarvan opgenomen door proximale tubulaire cellen. In aanwezigheid van een normale nierfiltratiesnelheid wijzen verhoogde serum b2M (Sb2M) – spiegels op een hoge B2M-productie of-release3., Na activering van het immuunsysteem geven zowel B – als T-lymfocyten actief b2M vrij in de circulatie van waaruit het later wordt geëlimineerd via glomerulaire filtratie en tubulaire reabsorptie.Er zijn verhoogde Sb2M-concentraties gevonden bij patiënten met bloedceldyscrasieën, waaronder multipel myeloom,5,6 maligne lymfoproliferatieve aandoeningen,7 myeloproliferatieve aandoeningen,8 bepaalde virale infecties zoals HIV-infectie9, cytomegalovirus, niet-A en niet-B hepatitis en infectieuze mononucleose.,Het niveau van Sb2M wordt ook gebruikt als een belangrijke prognostische factor bij patiënten met multipel myeloma5,6 en HIV-infecties.
het normale referentiebereik voor Sb2M bij gezonde individuen dat in de literatuur werd gevonden, werd bepaald met behulp van Noord-Amerikaanse en Europese populaties (DPC Immulite® assay). In een poging om het normale bereik van sb2m niveaus onder asymptomatische seronegatieve Afrikaanse individuen te bepalen, Piwowar et al. (1995)10 bleek dat 50% van deze proefpersonen abnormale waarden had (gemiddelde waarden 2,35 mg/mL). In een ander onderzoek was de gemiddelde Sb2M-waarde bij gezonde vrijwilligers 1,36 mg / mL.,11 in dit rapport beschrijven we Sb2M-waarden bij gezonde Braziliaanse proefpersonen van een groep bloeddonoren in het Hematologie-en Hemotherapiecentrum van Santa Catarina (HEMOSC).
patiënten
bloeddonoren, mannen en niet-zwangere vrouwen in de leeftijd van 25 tot 50 jaar, werden in het onderzoek opgenomen. Alle personen ondergingen een klinische beoordeling geëvalueerd door HEMOSC, inclusief vragenlijsten en screeningslaboratoriumtesten volgens Braziliaanse wettelijke criteria. Alle vrijwilligers die aan deze criteria voldeden, gaven mondeling en schriftelijk toestemming om nog eens 5 mL bloed te laten afnemen voor het studiedoel., Het experimentele protocol werd goedgekeurd door de Ethische Commissie van het Universitair Ziekenhuis van Florianópolis, Federale Universiteit van Santa Catarina.
methoden
volbloed werd verzameld met een Vacutainer systeem in 10 mL droge buisjes, en serum werd gescheiden door centrifugeren. Om lipidecomponenten te elimineren, werden serummonsters ultracentrifugeerd bij 18000 g gedurende 20 minuten. Alle bloedmonsters werden verkregen tussen 14: 00 en 18: 00 en werden verwerkt binnen 5 uur na vlindernaald (=aderpunctie)., Monsters werden vooraf verdund 1-in-41 in B2M Monsterverdunner (IMMULITE® Beta2 microglobuline kit, DPC, USA) volgens de instructies van de fabrikant, en 5 mL was nodig voor de assay procedure. Sb2M werd gemeten door middel van een chemiluminescent enzyme immunoassay in vaste fase 2 met behulp van de Immulite® Automated Analyzer (DPC, Los Angeles, USA).
statistische analyse
in het referentiebereik onderzoek voor de DPC IMMULITE® assay was de gemiddelde waarde 1,26 mg/mL., Het National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) behandelt het gebruik van A priori en a posteriori uitsluitingscriteria om gezonde monsters te verkrijgen.Daarom werden alle proefpersonen met Sb2M-waarden hoger dan 2,0 mg/mL klinisch opnieuw beoordeeld op acceptatie van de waarde om er zeker van te zijn dat elk individu “gezond”was. Gegevens werden ingevoerd en geanalyseerd met Microsoft Excel-software. De gemiddelde en standaarddeviatiewaarden werden berekend. De 95e percentielreferentiebereiken werden bepaald met behulp van 2,5 en 97,5 percentielen., Volgens de door de NCCLS aanbevolen procedure werden de waarnemingen gerangschikt naar grootte en werden de 2,5 en 97,5 percentielen verkregen als respectievelijk 0,025 (n + 1) en 0,975 (n + 1) geordende waarnemingen (n= steekproefgrootte). Als de geschatte rangwaarden geen gehele getallen waren, werd lineaire interpolatie uitgevoerd.12
resultaten
zesennegentig Braziliaanse bloeddonors, 60 mannen en 36 vrouwen, met een gemiddelde leeftijd van 33 jaar, werden in het onderzoek opgenomen. De waarden van Sb2M varieerden tussen 1,05 en 3,9 mg/mL, zoals weergegeven in Figuur 1, en het gemiddelde was 2,46 mg / mL (standaarddeviatie = 0,73)., Daarom werd bij gebruik van 97,5 e percentiel volgens een routinematige niet-parametrische methode 12 3,9 mg / mL beschouwd als de bovengrens van de normaalwaarde. Het vastgestelde bereik was 1,3-3,9 mg / mL.
discussie
onderzoekers over de hele wereld hebben het nut van Sb2M gerapporteerd als een betrouwbare maker bij het evalueren van progressie van HIV-infectie en multipel myeloom.5-8, 10, 13 bij HIV-geïnfecteerde proefpersonen lijkt Sb2M een betere voorspeller van de HIV-infectiestatus dan CD4-tellingen en ook een betere voorspeller van overleving, waarbij verhoogde sb2m-spiegels geassocieerd worden met ziekteprogressie.,Bij patiënten met multipel myeloom is een verhoogde productie en daaropvolgende afgifte van Sb2M in lichaamsvloeistoffen gemeld. Het belang van deze gegevens voor clinici is gebaseerd op het feit dat myeloma plasmacellen sb2m produceren. daarom wordt aangenomen dat Sb2M waarden niet alleen de grootte maar ook de proliferatieve activiteit van de myeloma cells13 zouden kunnen aangeven en als niet-specifieke maker van tumormassa zouden kunnen worden aanvaard.5,6,13,14 bovendien is de prognostische rol van Sb2M bij andere proliferatieve aandoeningen door vele auteurs bevestigd,7,14,15 die klinische beoordeling faciliteren.,Aan de andere kant is gemeld dat bij patiënten met een lage glomerulaire filtratiesnelheid de sb2m-spiegels werden verhoogd en dat laboratoriumbevindingen met voorzichtigheid moeten worden geïnterpreteerd.6,7,13
referentie-intervallen worden klinisch gebruikt, samen met aanvullende informatie, als richtlijnen voor de toestand van de patiënt. Het door de fabrikant gedefinieerde referentieonderzoek voor IMMULITE® Sb2M (1,01,7 mg/mL, gemiddeld 1,26 mg/mL) werd bepaald met serummonsters van bijna 800 volwassen vrijwilligers, zowel mannen als niet-zwangere vrouwen, variërend van 20 tot 70 jaar oud., De proefpersonen werden geselecteerd op basis van vragenlijsten. Monsters werden verzameld in Frankrijk, Duitsland, Nederland en Portugal, en de verkregen waarden werden niet-parametrisch geanalyseerd. De voorgestelde bovengrens was 1,7 mg / mL. Deze waarden zijn mogelijk niet representatief voor Braziliaanse individuen. Bij gebrek aan adequate referentiegrenzen voor Sb2M, afgeleid van een Braziliaanse populatie, hebben veel onderzoekers gebruik gemaakt van gegevens van Noord-Amerikaanse en Europese proefpersonen met een bovengrens die 2,3 keer lager was dan die welke in dit onderzoek werd verkregen.,
De NCCLS beveelt aan dat niet-parametrische referentie-intervallen worden gebruikt en dat de steekproefgrootte, n, uit ten minste 120 waarden moet bestaan om een 95% – referentie-interval, 2,5% – en 97,5% – punten van de distributie te berekenen12. Dit aantal is het minimumaantal waarden dat nodig is voor de constructie van de betrouwbaarheidsintervallen die informatie geven over de nauwkeurigheid van de berekende referentiegrenzen.
in dit onderzoek werden 96 monsters geëvalueerd., Ons doel was niet om nieuwe referentie-intervallen te produceren, maar om meer nadruk te leggen op de noodzaak dat elk laboratorium zijn eigen referentie-intervallen voor alle parameters produceert ondanks vele moeilijkheden, waaronder praktische en hoge kosten.
uit dit onderzoek blijkt dat er tussen verschillende populaties significant verschillende sb2m-waarden kunnen optreden, wat erop wijst dat elk Braziliaans laboratorium zijn eigen referentiegrenzen moet vaststellen.,dankbetuigingen wij danken Het Centrum voor hematologie en Hemotherapie van Santa Catarina en het laboratorium voor klinische analyse, Universitair Ziekenhuis van Florianópolis voor de monsters en de technische bijstand. We zijn DPC IMMULITE ® dankbaar voor het gratis leveren van de reagens set voor deze studie en Dr. Joanita Del Moral van de afdeling Hematologie, Universitair Ziekenhuis van Florianópolis.
2. Berggard I & Bearn AG. Isolatie en eigenschappen van een laag moleculair gewicht bèta-2-globuline die voorkomt in menselijke biologische vloeistoffen., J Biol Chem 1968; 243 (15):4095-103.
6. Greipp PR, Katzman JA, O ‘ Fallon WM, Kyle RA. Waarde van beta 2-microglobuline niveau en plasma cel etikettering indices als prognostische factoren bij patiënten met nieuw gediagnosticeerd myeloom. Blood 1988; 72 (1):219-23.
7. Constantines IP, Pathouli C, Karvountzis G, Papadopoulos P, Varvoutsi-Constantinides M, Eliakis P, et al. Serum beta 2 microglobuline bij maligne lymfoproliferatieve aandoeningen. Cancer 1985; 15 (10):2384-89.
8. Rodriguez J, Cortes J, Talpaz M, O’ Brien S, Smith TL, Rios MB, et al., Serum beta-2 microglobuline niveaus zijn een significante prognostische factor in Philadelphia chomosome-positieve chronische myelogene leukemie. Clin Cancer Res 2000; 6: 147-52.
10. Cooper E, Forbes m & Hammbling M. serum beta 2-microglobuline en c-Reactieve eiwitconcentraties bij virale infecties. J Clin Pathol 1985; 37: 1140-3.
11. Diamondstone LS, TOLLERUD DJ, Fuchs D, Wachter H, Brown LM, Maloney E, et al. Factoren die van invloed zijn op serumneopterine en beta 2-microglobuline niveaus in een gezonde diverse populatie. J Clin Immunol 1994; 14 (6): 368-74.
12., National Committee for Clinical Laboratory Standards. How to define and determinate reference intervallen in the clinical laboratory: approved guideline, nccls document C28-A and C28-A2, Villanova, PA, 1995, 2001, NCCLS.