Ethiek
Dit onderzoek werd uitgevoerd in overeenstemming met de regelgeving van de Verklaring van Helsinki (1964) en voldoet aan de Regionale Commissie Ethiek van Göteborg.
honden
twee honden werden gebruikt, Hanna, een 10-jarige zwarte reus Schnauzer (chip nr., 967000000389928), en Lotti, een 6-jarige zwarte reus Schnauzer (chip nr. 098100311386). De eigenaar en handler is GH. De honden leven als familie huisdier bij de eigenaar en zijn familie. Er is gratis toegang tot vers water de hele dag, en voeden drie keer per dag. De honden brengen elke dag enkele uren door in een tuin of op wandelingen. Gezondheidscontroles worden uitgevoerd in de dierenkliniek Värmdö, Gustavsberg.
opleiding
De opleidingsmethode is elders in detail beschreven . Gedurende 2 jaar voorafgaand aan dit onderzoek werd slechts eenmaal per week onderhoudstraining gebruikt., Elk van de trainingssessies omvatte 4-10 dozen , waarvan 0-3 kankerweefsel of bloed van patiënten met ovariumcarcinoom bevatten. De instelling werd willekeurig geselecteerd voor elke sessie. Met dit programma konden de honden bij elke trainingsmoment geconfronteerd worden met een ander probleem om op te lossen. De honden werden alleen beloond voor een correcte identificatie. Bloedmonsters met >500 E / ml CA-125 waarden als indicator voor ovariumcarcinoom werden gebruikt voor training. Eén druppel van het trainingsmonster werd in een kleine plastic schaal in elke doos geplaatst., De tijdens de trainingsperiode gebruikte bloedmonsters werden niet gebruikt bij de tests. De honden werden gebruikt in het experiment met toestemming van de regionale ethische beoordelingscommissie in Gotenburg, licentienummer: s-220-08. De honden hadden gratis toegang tot vers water tijdens trainings-en testuren. Na 2 uur werken werden de honden uitgelaten of hadden ze 20 minuten vrije tijd.
Patiëntenselectie
patiënten werden geselecteerd voor inclusie in deze retrospectieve studie uit de klinische en bio-bank databases. De laatste bevat bloed en kankerweefsel van patiënten met eierstokkanker., Materiaal werd verzameld na het verkrijgen van toestemming van de individuele patiënt en werd gereguleerd door het behandelingsprogramma voor eierstokkanker in West-Zweden. Eerst werd de patiënt geselecteerd uit de database van de kliniek, daarna werden de resultaten gecorreleerd met de database van de bio-bank om bloedmonsters te verkrijgen.
het belangrijkste selectiecriterium dat werd toegepast op alle studiepatiënten was klinische complete remissie (CR) vóór de zesde (laatste) geplande chemotherapiekuur. Patiënten geselecteerd voor Serie I werden verdeeld in 3 groepen., Groep A omvatte patiënten met een recidiefvrije overleving van 3 jaar, Groep B omvatte patiënten met een recidief binnen 6 maanden na de laatste behandelingssessie; en groep C omvatte patiënten met een recidief tussen 1 en 2 jaar na de behandeling. In totaal werden 66 patiënten met CR in de jaren 2001-2007 geselecteerd in Serie 1. Ze kwamen allemaal uit de omgeving van Göteborg en stonden ook in de bio-bank database. Tweeënveertig patiënten hadden monsters in een biobank die overeenkwamen met een van de drie secundaire selectiecriteria voor opname in Groep A, B of C., De selectie voor Series II werd alleen gemaakt met behulp van de biobank database.
bloedmonsters
bloedmonsters werden verzameld bij patiënten die in de regio Göteborg in West-Zweden woonden. De bevolking is ongeveer 600.000. Het behandelingsprogramma voor eierstokkanker in vereist Analyse CA-125 bij twee gelegenheden. Eerste, voorafgaand aan of direct na de primaire chirurgie, en de tweede voor de zesde kuur van chemotherapie behandeling. Echter, zoals gebruikelijk in het behandelingsprogramma voor ovariumcarcinoom, werd CA-125 niveau niet opgenomen in de follow-up, hoewel artsen de optie hebben om het te controleren., Bloedmonsters met >500 E/ml CA-125 waarden werden gebruikt voor de training van honden, waarbij één druppel in een klein plastic schaaltje in elke doos werd geplaatst. Tijdens de trainingsperiode gebruikte bloedmonsters werden niet gebruikt bij de tests.
Referentiebloedmonsters
materiaal voor de referentiegroep werd geselecteerd uit de biobankdatabank. Clinicopathologische variabelen werden niet in aanmerking genomen omdat onze vorige studieresultaten aantoonden dat ze geen invloed hadden op de detectiegevoeligheid van de honden ., In totaal werden 62 monsters (42 Voor Serie I en 20 voor Serie II), van verschillende personen, met CA-125 waarden >200 U/ml willekeurig geselecteerd als referentiemateriaal in serie I en II.
Testbloedmonsters in serie I
tweeënveertig monsters werden verzameld en gebruikt als testmateriaal in serie I. Deze bloedmonsters werden genomen vóór de zesde chemokuur. De patiënten werden in drie groepen verdeeld., Groep A bestond uit 13 patiënten met een CR, 3 jaar recidiefvrije overleving en normale (<35 E/ml) CA-125waarden vóór hun laatste behandelingskuur. Groep B bestond uit 12 patiënten met een CR, recidiverend binnen 6 maanden, en alle patiënten behalve 2 (61 E/ml; <200 E/ml) hadden CA-125 <35UI. Groep C bestond uit 17 patiënten met een CR, recidief tussen 1 en 2 jaar en normale CA-125 waarden. Tumor histopathologie, Stadium en graad varieerde binnen de groepen.,
bloedmonsters met >500 E/ml CA-125 waarden werden gebruikt voor training, waarbij één druppel in een klein plastic schaaltje in elke doos werd geplaatst. Tijdens de trainingsperiode gebruikte bloedmonsters werden niet gebruikt bij de tests.
Testbloedmonsters in Serie II
monsters werden genomen 3 en 6 maanden na de zesde, laatste chemotherapiekuur. Helaas konden we patiënten in serie I, Groep A, niet volgen omdat geen van hen bloed in de bloedbank had. We verzamelden bloed van 10 andere patiënten die regelmatig werden gevolgd., De mediane donorleeftijd was 65 jaar (spreiding 38-78 jaar).
Controlebloedmonsters
controlemonsters werden verzameld gedurende de twee jaar tussen 2007 en 2009, meestal bij vrouwelijke vrijwilligers van medisch personeel in Göteborg. Inclusiecriteria waren dat de patiënten zich gezond voelden, niet zwanger waren en vrij waren van gynaecologische aandoeningen. Controle – en testmaterialen waren niet afgestemd op de leeftijd. Jongere personen werden bewust gekozen als bron van controlemonsters om het risico op de aanwezigheid van asymptomatische eierstokkanker te verminderen., Zo hadden zowel de controle-als de testgroepen monsters van pre-en postmenopauzale vrouwen.
monstervoorbereiding
bloedmonsters werden verzameld in EDTA-buisjes en vervolgens gedurende 10 minuten gecentrifugeerd bij 3000 toeren per minuut met plasmapotten over de kleine plastic buisjes. Na centrifugering werd het plasma in twee delen verdeeld, één voor de analyse van CA-125 en de andere voor latere experimenten. Het laatste deel werd in de tumorbank op -80°C gehouden (licentienummer Ethische Commissie: s-220-08, regionale ethische Beoordelingsraad in Göteborg)., Controle plasma monsters werden verwerkt en opgeslagen identiek aan de doelen. Buisjes met controlebloed werden echter apart opgeslagen. De mediane donorleeftijd was 45 jaar (spreiding, 29-65 jaar).
testopzet
De Tests werden dubbelblind uitgevoerd zoals eerder beschreven . Om samen te vatten, zowel testleider en handler werden verblind voor de locatie van de doelmonsters, en waren aanwezig in de testlocatie alleen wanneer de honden aan het werk waren. De honden werden in twee series getest. Serie I had betrekking op 4 dagen (2 dagen per gelegenheid), terwijl Serie II 2 dagen omvatte., Tien runs werden elke dag uitgevoerd, behalve één dag in de eerste serie toen 11 runs werden uitgevoerd. Elke run omvatte zeven dozen, geplaatst in een cirkel ongeveer 2 m uit elkaar. Elke doos bevatte een druppel plasma; vijf bevatte controlematerialen, één bevatte een testmonster en één bevatte een referentiemonster. Referentiematerialen werden genomen vóór, of kort na de primaire operatie, en hadden dus een hoge concentratie van geurmoleculen. De plaatsing van de doel-en referentievakken werd gewijzigd door een assistent tussen elke run. Elke doos werd tussen de ritten schoongemaakt met alcohol., De tests werden gedocumenteerd op papier en DVD door de testleider en een assistent .
Hondenrespons
een positieve respons werd gedefinieerd als een indicatie van het doelvak door met de voorpoot te krabben, te liggen en te snuiven (en niet de controlemonsters aan te geven). Een negatieve respons werd gedefinieerd als snuiven en een controlebox aangeven en niet het doel aangeven. Een onzekere reactie werd gedefinieerd als stoppen bij de doos, ruiken, krabben, en mogelijk blaffen, maar rechtdoor gaan en niet liggen.,
behandeling van ovariumcarcinomen
overeenkomstig het standaardbehandelingsprogramma in West-Zweden werden patiënten behandeld met volledige hysterectomie, bilaterale salpingo-ooforectomie, omentectomie, meervoudige peritoneale biopten en peritoneale spoelingen met cytologie. Ongeveer 4 weken na de primaire operatie werd de eerste combinatie carboplatine, cyclofosfamide en epirubicine toegediend. In totaal werden zes kuren toegediend met intervallen van 4 weken.,
statistische methoden
de ruwe gegevens werden samengevat als gevoeligheid (de voorwaardelijke kans dat de hond kanker aanduidt wanneer de aandoening aanwezig was) en testspecificiteit (de voorwaardelijke kans dat de hond een monster van een gezonde donor negeert). Gevoeligheid en specificiteit geven inzicht in de algemene classificatie vermogen van de honden.
de positieve en negatieve voorspellende waarschijnlijkheid dat de test de juiste diagnose zou geven, werden ook berekend. Puntschattingen werden berekend met een betrouwbaarheidsinterval van 95%., Zowel de gevoeligheid als de specificiteit werden uitgedrukt in verhoudingen, zodat standaardtechnieken voor verhoudingen konden worden toegepast voor statistische gevolgtrekking. Betrouwbaarheidsintervallen waren gebaseerd op de normale benadering, p ± 1,96 p 1 − p / n, waarbij p de geschatte gevoeligheid is, de respectieve specificiteit en n het aantal testruns.