proefpersonen
de vrouwen werden gerekruteerd uit een fabriek in de stedelijke gemeenschap van Cuernavaca, 89 km south of Mexico City., De hemoglobineconcentratie bij alle vrouwen in de fabriek werd bepaald aan de hand van vingerprikbloedmonsters, gevolgd door een veneus bloedmonster om serumferritine te bepalen bij niet-anemische vrouwen. In totaal werden 20 Niet-bloedarmoede vrouwen met een lage ijzervoorraad aangeworven op basis van hemoglobineconcentratie ⩾125 g/l en serumferritineconcentratie <25 µg/l. uitsluitingscriteria waren zwangerschap en borstvoeding, gastro-intestinale of metabole stoornissen (inflammatoire darmziekte, chronische diarree, cystische fibrose), andere chronische ziekten en patiënten die ijzersupplementen gebruikten., In totaal werden 20 ogenschijnlijk gezonde zuigelingen (in de leeftijd van 6-24 maanden) en 20 ogenschijnlijk gezonde kinderen (in de leeftijd van 2-5 jaar) gerekruteerd uit moeders met voldoende hemoglobinewaarden. De proefpersonen en de ouders van de kinderen werden volledig geïnformeerd over de doelstellingen en procedures van het onderzoek en er werd schriftelijke toestemming verkregen. Het ethische Comité van het Instituto Nacional de Salud Pública, Cuernavaca, Mexico en het Zwitserse Federale Instituut voor Technologie, Zürich, Zwitserland hebben het protocol herzien en goedgekeurd.,
steekproefgrootte
berekening van de steekproefgrootte was gebaseerd op interindividuele en intraindividuele variaties in ijzerabsorptie zoals waargenomen in eerdere onderzoeken naar de biologische beschikbaarheid van ijzer bij zuigelingen en jonge kinderen (Davidsson et al., 1994, 1997, 2000, 2004). Er werd geschat dat 20 kinderen een minimale steekproefgrootte zouden hebben om een significant verschil van 50% in loggemiddelde ijzerabsorptie te detecteren ten opzichte van een rekenkundig gemiddelde ijzerabsorptie bij baseline van 7%, met 90% vermogen, een significantieniveau van 0,05 (ongepaarde t-test) en een type I foutenpercentage van 5%., Vooruitlopend op een uitvalpercentage van 10%, gaven deze schattingen aan dat ten minste 20 proefpersonen in elke groep nodig zouden zijn om de studies af te ronden.
onderzoeksopzet
vrouwen, zuigelingen en kinderen werden willekeurig toegewezen om de testmaaltijd op opeenvolgende dagen met ferrosulfaat of met ferrofumaraat te ontvangen. De testmaaltijd werd toegediend als ontbijt na een nacht vasten. De aanvaardbaarheid van de testmaaltijd werd bevestigd bij elke zuigeling en elk kind vóór deelname aan het onderzoek. Gedurende 3 uur na volledige inname van de geëtiketteerde maaltijd werd geen eten of drinken toegestaan., Zuigelingen en kinderen bleven onder nauwlettend toezicht tijdens en na de inname van de testmaaltijd.
in totaal werd 5 ml veneus bloed in met EDTA behandelde tubes opgenomen vlak voor de inname van de eerste testmaaltijd en opnieuw 14 dagen later. Bloedmonsters werden geanalyseerd voor de ijzerstatusindicatoren (hemoglobine en serumferritine) en ijzerisotopische samenstelling. Het lichaamsgewicht en de lengte werden gemeten op elk punt van de bloedbemonstering.
testmaaltijd
De testmaaltijd was een gezoete maïsmelkdrank op basis van de lokale Mexicaanse maïsmeelpapdrink “atole”. Het werd gemaakt van gedemineraliseerd maïsmeel (24.,7%), vollemelkpoeder (11,7%),’ piloncillo ‘ (een vaste vorm van ongeraffineerde bruine suiker; 63,5%) en gezuiverd water (200 ml) zonder toevoeging van ijzer of ascorbinezuur. Gestandaardiseerde testmaaltijden werden speciaal voor de studie bereid uit lokaal beschikbare levensmiddelen die in bulk werden gekocht, met uitzondering van het gedegermde maïsmeel dat niet beschikbaar was in Mexico en werd verkregen uit Zwitserland (Swiss Mill, Zürich, Zwitserland). Gedemineraliseerd maïsmeel werd gebruikt om het gehalte aan fytinezuur van het meel te minimaliseren, wat anders de biologische beschikbaarheid van ijzer uit het testmeel zou verminderen (Hurrell et al., 2002)., De testmaaltijd werd gekookt in een keukenfaciliteit en warm getransporteerd naar het Voedingscentrum in de fabriek, waar een portie van 220 g per vrouw en 60 g per baby en kind werd bereid als ontbijt en werd gevolgd door de inname van water. Alle testmaaltijden waren identiek, behalve de toevoeging van 4 mg Fe (vrouwen) of 2,5 mg Fe (zuigelingen en kinderen) als ferrofumaraat of ferrosulfaat, die onmiddellijk voor het opdienen aan de testmaaltijd werden toegevoegd. Ferrofumaraat poeder werd direct toegevoegd aan de test maaltijd en Ferro Sulfaat werd toegevoegd als oplossing.,
stabiele isotopenetiketten
isotopisch geëtiketteerd ferrofumaraat werd geproduceerd door Dr.Paul Lohmann GmbH (Emmerthal, Duitsland) uit verrijkt elementair ijzer volgens een ingekalmde procedure van hun gelijkwaardige commerciële fabricageprocédé. Dezelfde procedure is gebruikt voor eerdere studies (Davidsson et al., 2000, 2001, 2002; Fidler et al., 2003; Sarker et al., 2004). Individuele doses ferrofumaraat werden vooraf gewogen in polyethyleenbuizen, waarbij de exacte hoeveelheid werd bepaald door het gewicht van de buis, en vervolgens werden opgeslagen., – ferrosulfaat werd bereid uit isotopisch verrijkt elementair ijzer (Chemgas, Boulogne, Frankrijk), dat werd opgelost in 0,1 mol H2SO4/l en tot de juiste concentratie werd bereid. De oplossing werd bewaard onder argonatmosfeer in een polyethyleenfles totdat het nodig was en gewogen in individuele doses voordat het werd toegediend.,
De isotopensamenstelling van beide labels werd in drievoud gemeten door negatieve thermische ionisatie massaspectrometrie met behulp van een magnetische sectorveldmassaspectrometer (MAT262; Finnigan MAT, Bremen, Duitsland) uitgerust met een multi-collectorsysteem van Faraday-bekers voor ionendetectie. De ijzerconcentratie van elk etiket werd in drievoud gemeten door inverse isotopische verdunning (Walczyk, 1997). Ferrofumaraat werd opgelost in geconcentreerd salpeterzuur vóór isotopische verdunning., De ijzerstandaard van natuurlijke isotopensamenstelling werd gravimetrisch vervaardigd uit een isotopisch referentiemateriaal (IRMM-014; E. U. Institute of Reference Materials and Measurements, Geel, België). Isotopische verhoudingen werden gemeten door negatieve thermische ionisatie massaspectrometrie (Walczyk, 1997).
isotopische samenstelling van bloedmonsters
verrijkt volbloed monsters werden gemineraliseerd door microgolfvertering met een mengsel van geconcentreerde HNO3 en H2O2 (30%) als oxiderende stoffen., Ijzer werd van de matrix gescheiden door anionenuitwisselingschromatografie en een vloeistof-vloeistofextractiestap in diethylether (Walczyk et al., 1997). Chemische blanks werden gedurende de hele procedure verwerkt. Isotopische samenstelling van gescheiden ijzer werd gemeten door negatieve thermische ionisatie massaspectrometrie.
Ijzerstatus
vers getrokken volbloed monsters werden aliquoten voor het meten van de hemoglobineconcentratie met behulp van een draagbare HemoCue fotometer (Hemocue Inc., Angelholm, Zweden) en gestandaardiseerde technieken., Overeenkomstig kwaliteitscontrole materiaal werd geanalyseerd aan het begin van elke bemonsteringsdag (Hemocue Inc., Angelholm, Zweden). Een aliquot van volbloed werd gescheiden voor serum ferritine metingen door geautomatiseerde immunoassay (Immulite One; DPC, Los Angeles, CA, USA) in ETH, Zürich, en het resterende volbloed werd ingevroren voor latere analyse van isotopische samenstelling.,
berekening van ijzerabsorptie
de hoeveelheden 57Fe en 58Fe isotopenetiketten in bloed werden 14 dagen na toediening berekend op basis van de verschuiving van de FE-isotopenverhoudingen en de geschatte hoeveelheid circulerend ijzer in het lichaam. De berekeningen waren gebaseerd op de beginselen van isotopische verdunning, rekening houdend met het feit dat de ijzerisotopische etiketten niet mono-isotopisch waren. Circulerend ijzer werd berekend op basis van het bloedvolume en de hemoglobineconcentratie. Bloedvolume berekeningen werden gebaseerd op lichaamsgewicht en lengte volgens Brown et al. (1962) voor vrouwen en Linderkamp et al., (1977) voor kinderen. Voor berekeningen van fractionele ijzerabsorptie werd aangenomen dat 80% van het geabsorbeerde ijzer in erytrocyten werd opgenomen voor vrouwen (Hosein et al., 1967) en 90% voor de kinderen (9). De RBV van ferrofumaraat werd berekend voor elke reeks gegevens.
statistische analyse
fractionele ijzerabsorptiewaarden worden gepresenteerd als geometrische gemiddelden en s.d. Alle statistische tests werden uitgevoerd bij 80% en met een 95% betrouwbaarheidsinterval op de log-getransformeerde gegevens, omdat ijzerabsorptiewaarden normaal niet worden verdeeld., De gepaarde t-test van de Student werd gebruikt om de gegevens binnen elke leeftijdsgroep te vergelijken. De RBV van ferrofumaraat tussen leeftijdsgroepen werd vergeleken met behulp van de ongepaarde t-test van de Student. Statistische vermogensanalyse werd uitgevoerd met behulp van commerciële software (StatMate 2; GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Lineaire regressie werd gebruikt om de relatie tussen ijzerabsorptie en ijzeropslag te evalueren (vertegenwoordigd door serumferritine) en Pearson ‘ s correlatie werd gebruikt om de relatie tussen serumferritine en RBV te onderzoeken.