Etikk
Denne studien ble utført i samsvar med bestemmelser i Helsinki-Deklarasjonen (1964) og i henhold til den Regionale Etiske Komité, Gøteborg.
Hunder
To hunder som ble brukt, Hanna, en 10-år gammel svart Gigantiske Schnauzer (chip nr., 967000000389928), og Lotti, en 6-år gammel svart Gigantiske Schnauzer (chip nr. 098100311386). Eier og handler GH. Hundene leve som familie kjæledyr med eieren og hans familie. Det er gratis tilgang til friskt vann hele dagen, og spise tre ganger om dagen. Hundene bruker flere timer hver dag i en hage eller på turer. Helse sjekker er gjort på Värmdö dyreklinikk, Gustavsberg.
Trening
trening metoden er beskrevet i detalj andre steder . For 2 år før undersøkelsen, bare én gang i uken for vedlikehold-opplæring ble brukt., Hver av opplæringen økter inkludert 4-10 bokser , 0-3 som inneholdt kreft vev eller blod fra pasienter med eggstokkreft karsinom. Oppsettet var tilfeldig valgt før hver økt. Dette programmet tillatt hundene til å bli konfrontert med et annet problem å løse i hver trening anledning. Hundene ble belønnet bare for en korrekt identifisering. Blodprøver med >500 U/ml CA-125-verdier som en indikator for eggstokkreft karsinom ble brukt til trening. En dråpe av den opplæring som eksempel ble plassert i en liten plast tallerken inne i hver boks., Blodprøver som ble brukt under trening perioden ble ikke brukt i testene. Hundene ble brukt i eksperimentet med tillatelse fra Regional Etisk Review Board i Göteborg, lisensnummer: S-220-08. Hundene hadde gratis tilgang til friskt vann under trening og testing timer. Etter 2 timer med arbeid, ble hundene gikk eller hadde 20 minutter av fritiden.
Pasienten utvalget
Pasienter ble valgt ut for inkludering i dette retrospektiv studie fra klinikken og bio-bank databaser. Sistnevnte inneholder blod og kreft vev fra pasienter med eggstokkreft., Materialet ble samlet inn etter å ha innhentet tillatelse fra den enkelte pasient, og var regulert av behandlingen program for ovarian kreft i Vest-Sverige. Pasienten utvalget først ble gjort fra klinikken database, så resultatene var korrelert med bio-bank database for å få tak i blodprøver.
De store utvalget kriteriet anvendes for alle studie av pasienter som var klinisk komplett remisjon (CR) før den sjette (endelig) planlagt kjemoterapi kurs. Pasienter som er valgt for Serien jeg ble delt inn i 3 grupper., Gruppe A, inkludert pasienter med 3 år for tilbakefall-fri overlevelse, Gruppe B inkludert pasienter som hadde tilbakefall innen 6 måneder etter siste behandling økt, og for Gruppe C inkludert pasienter som hadde tilbakefall mellom 1 og 2 år etter behandling. Av en total av 66 pasienter med CR i årene 2001-2007 ble valgt i Serie 1. Alle var fra Göteborg-området, og var også i bio-bank database. Førti-to pasienter hadde prøvene i en biobank som svarer til ett av de tre sekundære kriterier for inkludering i Gruppe A, B eller C., Utvalget for Series II ble gjort ved hjelp av biobank bare database.
blodprøver
blodprøver ble tatt fra pasienter som bor i Gøteborg-området i Vest-Sverige. Befolkningen er rundt 600.000. Behandlingen program for ovarian kreft i krever CA-125 analyse ved to anledninger. Først, før eller rett etter primær operasjon, og den andre før den sjette løpet av cellegiftbehandling. Men, som vanlig i behandling program for ovarian carcinoma, CA-125-nivået ble ikke inkludert i oppfølging, selv om legene har mulighet til å sjekke det., Blodprøver med >500 U/ml CA-125-verdier ble brukt til hund trening, med en dråpe blir plassert i en liten plast tallerken inne i hver boks. Blodprøver som ble brukt under trening perioden ble ikke brukt i testene.
Referanse blodprøver
Materiale for referansegruppen ble valgt fra bio-bank database. Clinicopathological variabler ble ikke vurdert fordi vår tidligere studie resultatene viste at de ikke påvirker hundens sensitivitet for deteksjon ., Totalt 62 prøver (42 for Serien jeg og 20 for Series II), fra ulike individer, med CA-125-verdier >200 U/ml ble tilfeldig valgt som referansemateriale i Serie i og II.
Test blodprøver i Serien jeg
Førti-to prøver ble samlet inn og brukt som test materiale i Serien I. Disse blodprøver ble tatt før den sjette løpet av kjemoterapi. Pasientene ble delt inn i tre grupper., Gruppe A besto av 13 pasienter som hadde en CR, 3-års-tilbakefall-fri overlevelse, og normal (<35 U/ml) CA-125values før sin siste behandling kurs. Gruppe B besto av 12 pasienter som hadde en CR, tilbakefall innen 6 måneder, og alle bortsett fra 2 (61 U/ml; <200 U/ml) hadde CA-125 <35UI. Gruppe C besto av 17 pasienter med en CR, gjentakelse mellom 1 og 2 år, og normalt CA-125-verdier. Svulst histopatologi, scene og klasse variert i grupper.,
blodprøver med >500 U/ml CA-125-verdier ble brukt til trening, med en dråpe blir plassert i en liten plast tallerken inne i hver boks. Blodprøver som ble brukt under trening perioden ble ikke brukt i testene.
Test blodprøver i Serie II
det ble tatt Prøver 3 og 6 måneder etter den sjette, siste kjemoterapi kurs. Dessverre, vi kunne ikke følge pasienter i Serien jeg, Gruppe A, fordi ingen av dem hadde blod i blod bank. Vi samlet inn blod fra 10 andre pasienter som ble fulgt regelmessig., Median donor alder var 65 år (range, 38-78 år).
Kontroll blodprøver
Kontroll prøvene ble samlet inn i løpet av 2 år mellom 2007 og 2009, hovedsakelig fra kvinnelige medisinsk personale frivillige i Gøteborg. Inklusjonskriterier var at pasientene følte seg frisk, ikke ble gravid og var fri for gynekologisk sykdom. Kontroll og test materialer var ikke alder-matchet. Yngre personer ble bevisst valgt som kilde av kontrollprøver for å redusere risikoen for tilstedeværelsen av asymptomatiske for ovarian kreft., Dermed er både kontroll og test grupper hadde prøver fra pre-og postmenopausale kvinner.
prøveopparbeidelse
blodprøver ble samlet inn i EDTA rør, og så sentrifugerte ved 3000 rpm i 10 min med plasma potter over små plastrør. Etter sentrifugering, plasma ble delt inn i to deler, en for CA-125-analysen og den andre for påfølgende eksperimenter. Den siste delen ble holdt ved -80°C i tumor bank (Etisk Komité lisens nummer: S-220-08, Regionale Etiske Review Board i Gøteborg)., Kontroll plasmaprøver ble behandlet og lagret identisk til mål. Imidlertid, rør med kontroll blod ble lagret separat. Median donor alder var 45 år (range, 29-65 år).
Test design
Testene ble utført i en dobbel-blind måte som tidligere beskrevet . For å oppsummere, både test-leder og fører var blindet for plasseringen av målet prøvene, og var til stede i testen beliggenhet bare når hundene jobbet. Hundene ble testet i to serier. Serien jeg dekket 4 dager (2 dager per anledningen), mens Series II dekket 2 dager., Ti kjøringer ble utført på hver dag, bortsett fra en dag i Serien jeg når 11 kjøringer ble utført. Hver kjører inkludert syv bokser, plassert i en sirkel som er ca 2 m fra hverandre. Hver boks inneholdt en dråpe av plasma, fem inneholdt kontroll materialer, en inneholdt en test-prøven, og en inneholdt en referanse eksempel. Referansemateriale det ble tatt før eller kort tid etter primær operasjon, og dermed hadde en høy konsentrasjon av lukt molekyler. Plassering av mål-og referanse-bokser har blitt endret av en assistent mellom hver kjøring. Hver boks var rengjøres med alkohol mellom går., Testene ble dokumentert på papir og DVD av test-leder og en assistent .
Hund svar
En positiv respons ble definert som indikerer mål-boksen ved å skrape med foreleg, liggende og sniffing det (og ikke noe som indikerer kontroll-prøver). En negativ respons ble definert som å snuse, og indikerer en kontrollboks og ikke noe som indikerer målet. En usikker respons ble definert som å stoppe på boksen, lukter det, skrape på det, og muligens barking, men går rett på og ikke liggende.,
Behandlingen av ovarian carcinoma
I tråd med standard behandling program i Vest-Sverige, pasienter ble behandlet av total hysterektomi, bilateral salpingo-oophorectomy, omentectomy, flere peritoneal biopsi, og peritoneal washings med cytologi. Ca 4 uker etter primær operasjon første carboplatin, cyklofosfamid, og epirubicin kombinasjonen ble gitt. Totalt seks kurs ble gitt ved 4 ukers intervaller.,
Statistiske metoder
– rådata ble oppsummert som følsomhet (den betingede sannsynligheten for at en hund som indikerer kreft når tilstanden var tilstede) og test spesifisitet (den betingede sannsynligheten for hunden å ignorere et eksempel fra en frisk giver). Sensitivitet og spesifisitet gi innsikt i generell klassifisering evne til hunder.
De positive og negative prediktive sannsynligheten for at testen ville gi riktig diagnose ble også beregnet. Punkt estimatene ble beregnet med 95% konfidensintervaller ., Både sensitivitet og spesifisitet ble uttrykt som proporsjoner, og dermed standard teknikker for proporsjoner kunne brukes for statistisk inferens. Konfidensintervallene var basert på normal tilnærming, s ± 1.96 s 1 − s / n der p er beregnet sensitivitet, respektive spesifisitet og n er antall tester går.