la RICERCA ORIGINALE
Siero b2-microglobulina valori tra sana Brasiliani utilizzando un DPC IMMULITE® dosaggio
i Valori di b2-microglobulina em brasileiros saudáveis utilizzando o un sistema automatizzato DPC IMMULITE®
Fabíola Branco Filippin; Liliete Canne Souza
Dipartimento di Analisi Cliniche, la Scienza e il Centro di Salute, Università Federale di Santa Catarina – Florianópolis/SC, Brasile. E-mail: liliete @ ccs.ufsc.,br
ABSTRACT
SCOPO: Il presente studio è stato progettato per determinare il range normale dei livelli di beta 2-microglobulina sierica (Sb2M) tra volontari sani in Brasile. I livelli di Sb2M sono elevati nei pazienti con infezione da virus dell’immunodeficienza umana (HIV) e hanno dimostrato di essere il miglior predittore dello stato di infezione da HIV e di alcuni disturbi maligni, in particolare il mieloma multiplo., Al fine di ottenere il suo uso ottimale nella diagnosi clinica brasiliana, è stato eseguito un adeguato studio dell’intervallo di riferimento per il saggio Sb2M IMMULITE®, basato sul fatto che i suoi limiti di intervallo di riferimento sono stati valutati tra le popolazioni europee.
METODI: sono stati valutati novantasei donatori di sangue sani e i livelli di Sb2M sono stati misurati mediante saggio immunoenzimatico chemiluminescente utilizzando l’analizzatore automatizzato IMMULITE®.
RISULTATI: Un intervallo normale di valori Sb2M, stabilito con un metodo statistico non parametrico, era compreso tra 1,05 e 3,9 mg/mL, con il limite superiore superiore a quello riportato altrove.,
CONCLUSIONI: Questo studio ha presentato nuovi dati che indicano che esiste una differenza significativa tra gli attuali limiti di riferimento per il saggio Sb2M IMMULITE® e quelli trovati in Brasile, fornendo la prova che differenze significative nell’intervallo di valori normali possono verificarsi tra diverse popolazioni e che questi nuovi valori dovrebbero essere considerati per gli individui brasiliani.
Parole chiave: b2-microglobulina. Intervallo di riferimento. Immunoassay chemiluminescente. Volontari sani. Valore prognostico.,
abstract
obiettivo: l’obiettivo di questo studio era determinare i valori basali della B2-microglobulina sierica (Sb2M) in volontari sani. È noto che questo parametro è elevato nei pazienti infettati con il virus dell’immunodeficienza umana (HIV) e ha dimostrato di essere un marcatore migliore dell’infezione da HIV e dei disturbi maligni, in particolare il mieloma multiplo., Al fine di ottenere la migliore diagnosi clinica, è stato determinato un adeguato intervallo di riferimento di Sb2M per la popolazione brasiliana utilizzando il test IMMULITE®; poiché questo ha come parametro un intervallo di riferimento determinato dalle popolazioni europee.
metodi: sono stati valutati novantasei donatori di sangue sani e i valori Sb2M sono stati misurati con il metodo immunoassay enzimatico chemiluminescente utilizzando IMMULITE®automated analyzer.
risultati: i valori di Sb2M, stabiliti con metodo statistico non parametrico, erano compresi tra 1,05 e 3.,9 mg / ml, e il limite superiore ottenuto era superiore a quello riportato in altri studi.
conclusione: questo studio ha presentato nuovi valori, indicando che esiste una differenza significativa tra i limiti di riferimento di Sb2M disponibili per IMMULITE® e quelli trovati nel presente studio, evidenziando il verificarsi di importanti variazioni tra le diverse popolazioni e che nuovi valori dovrebbero essere considerati per i brasiliani.
Uniterms: B2-microglobulina. Intervallo di riferimento. Immunoassay chemiluminescente. Volontari sani. Valore prognostico.,
Beta 2-microglobulina (b2M) una proteina presente in tutte le cellule nucleate, è associata ad antigeni di classe 1 di istocompatibilità sulle membrane superficiali cellulari (particolarmente abbondanti su linfociti e monociti).1 È stato scoperto per la prima volta nelle urine di pazienti con insufficienza renale.2 A causa del suo basso peso molecolare (11.800 dalton), il 95% di tutto il b2M libero nel plasma viene eliminato mediante filtrazione glomerulare e il 99,9% di esso viene assorbito dalle cellule tubolari prossimali. In presenza di una normale velocità di filtrazione renale, elevati livelli sierici di B2M (Sb2M) indicano un’elevata produzione o rilascio di B2M3., Dopo l’attivazione del sistema immunitario, sia i linfociti B che i linfociti T rilasciano attivamente b2M in circolazione da dove viene successivamente eliminato tramite filtrazione glomerulare e riassorbimento tubulare.4 È stato riscontrato un aumento delle concentrazioni di Sb2M in pazienti con discrasia delle cellule del sangue, tra cui mieloma multiplo,5,6 malattie linfoproliferative maligne,7 malattie mieloproliferative,8 alcune infezioni virali come l’infezione da HIV 9, citomegalovirus, epatite non A e non B e mononucleosi infettiva.,10 Il livello di Sb2M è anche usato come un importante fattore prognostico nei pazienti con mieloma multiplo 5,6 e infezioni da HIV.9
Il range di riferimento normale per Sb2M in individui sani trovato in letteratura è stato determinato utilizzando popolazioni nordamericane ed europee (DPC Immulite® assay). Nel tentativo di determinare la gamma normale dei livelli di Sb2M tra gli individui africani sieronegativi asintomatici, Piwowar et al. (1995)10 ha rilevato che il 50% di questi soggetti aveva valori anormali (valori medi 2,35 mg/mL). In un altro studio, il valore medio di Sb2M tra volontari sani è stato di 1,36 mg / mL.,11 In questo rapporto, descriviamo i valori Sb2M in soggetti brasiliani sani da un gruppo di donatori di sangue presso il Centro di ematologia ed emoterapia di Santa Catarina (HEMOSC).
SOGGETTI
Donatori di sangue, uomini e donne non gravide di età compresa tra 25 e 50 anni, sono stati inclusi nello studio. Tutti gli individui sono stati sottoposti a una valutazione clinica valutata da HEMOSC, inclusi questionari e test di laboratorio di screening secondo i criteri legali brasiliani. Tutti i volontari che soddisfano questi criteri hanno dato il consenso verbale e scritto per avere un ulteriore 5 mL di sangue prelevato per lo scopo dello studio., Il protocollo sperimentale è stato approvato dal Comitato Etico dell’Ospedale universitario di Florianópolis, Università Federale di Santa Catarina.
METODI
Il sangue intero è stato raccolto con un sistema Vacutainer in provette asciutte da 10 mL e il siero è stato separato mediante centrifugazione. Al fine di eliminare i componenti lipidici, i campioni di siero sono stati ultracentrifugati a 18000 g per 20 min. Tutti i campioni di sangue sono stati ottenuti tra 2: 00 p. m. e 6: 00 p.m. e sono stati trattati entro 5 h dopo venipuntura., I campioni sono stati prediluiti 1-in41 nel diluente per campioni b2M (IMMULITE® Beta-2 Microglobulin kit, DPC, USA) secondo le istruzioni del produttore e sono stati necessari 5 mL per la procedura di analisi. Sb2M è stato misurato con un saggio immunoenzimatico chemiluminescente in fase solida a 2 siti utilizzando l’analizzatore automatizzato IMMULITE® (DPC, Los Angeles, USA).
Analisi statistica
Nello studio dell’intervallo di riferimento per il saggio DPC IMMULITE®, il valore medio era di 1,26 mg / ml., Il Comitato nazionale per gli standard di laboratorio clinico (NCCLS) affronta l’uso di criteri di esclusione a priori ea posteriori per ottenere campioni sani.12 Pertanto, tutti i soggetti con valori Sb2M superiori a 2,0 mg / mL sono stati rivalutati clinicamente per l’accettazione del valore per garantire che ogni individuo fosse “sano”. I dati sono stati inseriti e analizzati con il software Microsoft Excel. Sono stati calcolati i valori medi e la deviazione standard. Gli intervalli di riferimento del 95 ° percentile sono stati determinati utilizzando 2,5 e 97,5 percentili., Secondo la procedura raccomandata dall’NCCLS, le osservazioni sono state classificate in base alle dimensioni e i percentili 2.5 e 97.5 sono stati ottenuti rispettivamente come osservazioni ordinate 0.025 (n + 1) e 0.975 (n + 1) (n= dimensione del campione). Se i valori di rango stimati non erano interi, è stata eseguita l’interpolazione lineare.12
RISULTATI
Novantasei donatori di sangue brasiliani, 60 uomini e 36 donne, con età media (anno) di 33, sono stati inclusi nello studio. I valori di Sb2M variavano tra 1,05 e 3,9 mg / mL, come mostrato nella Figura 1, e la media era di 2,46 mg/mL (deviazione standard = 0,73)., Pertanto, utilizzando il 97,5 ° percentile secondo un metodo non parametrico di routine, 12 3,9 mg/mL è stato considerato il limite normale superiore. L’intervallo stabilito era di 1,3-3,9 mg / ml.
DISCUSSIONE
Ricercatori di tutto il mondo hanno riportato l’utilità di Sb2M come produttore affidabile nella valutazione della progressione dell’infezione da HIV e del mieloma multiplo.5-8,10,13 Nei soggetti con infezione da HIV, Sb2M sembra essere un migliore predittore dello stato di infezione da HIV rispetto alla conta CD4 e anche un migliore predittore della sopravvivenza, con un aumento dei livelli di Sb2M associato alla progressione della malattia.,10
È stato riportato un aumento della produzione e il conseguente rilascio di Sb2M nei fluidi corporei in pazienti con mieloma multiplo. L’importanza di questi dati per i medici si basa sul fatto che le plasmacellule del mieloma producono Sb2M. Pertanto, si presume che i valori di Sb2M possano indicare non solo la dimensione ma anche l’attività proliferativa delle cellule del mieloma13 e potrebbero essere accettati come produttori non specifici di massa tumorale.5,6,13,14 Inoltre, il ruolo prognostico di Sb2M in altre malattie proliferative è stato confermato da molti autori, 7, 14, 15 facilitando la valutazione clinica.,15 D’altra parte, è stato riportato che in pazienti con bassa velocità di filtrazione glomerulare, i livelli di Sb2M sono stati aumentati e i risultati di laboratorio devono essere interpretati con cautela.6,7,13
Gli intervalli di riferimento sono usati clinicamente, insieme ad ulteriori informazioni, come linee guida riguardanti lo stato del paziente. Lo studio della gamma di riferimento per IMMULITE ® Sb2M (1,0-1,7 mg/mL, media 1,26 mg/mL) definito dal produttore è stato determinato utilizzando campioni di siero provenienti da quasi 800 volontari adulti, inclusi uomini e donne non gravide, di età compresa tra 20 e 70 anni., I soggetti sono stati selezionati sulla base di questionari. I campioni sono stati raccolti in Francia, Germania, Paesi Bassi e Portogallo e i valori ottenuti sono stati analizzati in modo non parametrico. Il limite superiore suggerito era di 1,7 mg / mL. Questi valori potrebbero non essere rappresentativi per gli individui brasiliani. In assenza di limiti di intervallo di riferimento adeguati per Sb2M derivati da qualsiasi popolazione brasiliana, molti ricercatori hanno utilizzato dati ottenuti da soggetti nordamericani ed europei che presentavano limiti superiori 2,3 volte inferiori a quelli ottenuti nel presente studio.,
L’NCCLS raccomanda di utilizzare intervalli di riferimento non parametrici e che la dimensione del campione, n, consista di almeno 120 valori per calcolare un intervallo di riferimento del 95%, 2,5% e 97,5% punti della distribuzione12. Questo numero è il numero minimo di valori necessari per la costruzione degli intervalli di confidenza che forniscono informazioni sull’accuratezza dei limiti di riferimento calcolati.
In questo studio sono stati valutati 96 campioni., Il nostro obiettivo non era quello di produrre nuovi intervalli di riferimento, ma di focalizzare maggiormente l’attenzione sulla necessità per ogni laboratorio di produrre i propri intervalli di riferimento per tutti i parametri nonostante molte difficoltà, comprese quelle pratiche e le spese elevate.
Il presente studio indica che gamme significativamente diverse di valori Sb2M possono verificarsi tra diverse popolazioni, suggerendo che ogni laboratorio brasiliano dovrebbe stabilire i propri limiti di riferimento.,
RINGRAZIAMENTI
Ringraziamo il Centro di ematologia ed Emoterapia di Santa Catarina e il laboratorio di analisi clinica, Ospedale Universitario di Florianópolis per i campioni e l’assistenza tecnica. Siamo grati a DPC IMMULITE® per aver fornito gratuitamente il set di reagenti per questo studio e alla Dott. ssa Joanita Del Moral della divisione di ematologia, Ospedale universitario di Florianópolis.
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8. In questo caso, la società è in grado di fornire servizi di consulenza e consulenza., I livelli sierici di beta-2 microglobuline sono un fattore prognostico significativo nella leucemia mieloide cronica chomossoma-positiva di Philadelphia. Clin Cancer Res 2000;6:147-52.
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