L’Emoglobinuria parossistica Notturna (PNH)

Tabella 1

Ci sono Fattori Che Potrebbero Influenzare i Risultati di Laboratorio?, In particolare, il paziente prende farmaci-farmaci OTC o prodotti di erboristeria-che potrebbero influenzare i risultati di laboratorio?

L’uso del tubo di raccolta errato, ad esempio EDTA, può bloccare l’attivazione del complemento e produrre risultati falsi negativi nel test di lisi del saccarosio. La maggior parte dei metodi ora utilizza soluzioni di saccarosio tamponate, poiché le soluzioni di saccarosio non tamponate possono anche produrre risultati falsi negativi. L’EDTA può anche bloccare l’attivazione del complemento nel test del siero acidificato, producendo un risultato falso negativo. È necessaria una regolazione accurata del pH per il pH 6.78 +/- 0.1 per risultati affidabili., L’uso di un laboratorio di riferimento può essere richiesto se la lisi di saccarosio e i test del siero acidificato non sono di routine presso il vostro istituto. L’emosiderina urinaria non deve essere intracellulare per essere considerata positiva, dato che l’urina normale dovrebbe essere negativa per i granuli di emosiderina.

Quali risultati di laboratorio sono assolutamente confermativi?

Una diagnosi definitiva di EPN è disponibile tramite citometria a flusso. I pazienti con EPN hanno ridotto l’espressione di una proteina chiamata proteine di ancoraggio del glicofosfatidilinositolo (GPI) sui globuli rossi., Di conseguenza, ci sarà una diminuzione del legame di CD55 e CD59, che modulano l’attività del complemento e si legano principalmente alla superficie cellulare GPI. Sia CD55 che CD59 possono essere diminuiti sulle superfici dei globuli rossi; tuttavia, poiché CD55 è più altamente espresso rispetto a CD59, è più probabile che fornisca il risultato definitivo.

La citometria a flusso è molto sensibile e può misurare piccole popolazioni cellulari o cloni colpiti dalla malattia (al livello dell ‘ 1-5%). Può anche rilevare l’emergere di questi cloni in anemia aplastica o pazienti con midollo osseo ipoplastico., Come con la maggior parte della citometria a flusso, il sangue deve essere raccolto in provette eparinizzate e valutato entro 24 ore dalla raccolta per un test ottimale.

Quali test di conferma devo richiedere per il mio Dx clinico? Inoltre, quali test di follow-up potrebbero essere utili?

Il gene responsabile della EPN è il gene del fosfatidilinositolglicano A (PIG-A). Si trova sul cromosoma X. Le mutazioni somatiche associate alla PNH possono essere altamente variabili. La maggior parte delle mutazioni consiste in piccole eliminazioni o inserimenti di coppie di basi, ma possono verificarsi anche sostituzioni di base., Le mutazioni tipicamente conducono ad un frameshift del DNA e conseguentemente provocano la trascrizione e la traduzione riduttori del prodotto della proteina.

Le mutazioni possono verificarsi anche in più posizioni all’interno del gene PIG-A. Le mutazioni nella PNH associata all’anemia aplastica tendono ad essere più grandi e / o più frequenti rispetto ai pazienti con solo PNH. Oltre alle proteine modulanti del complemento (CD55 e CD59), il GPI lega molte altre proteine che possono influenzare variabilmente la stabilità della membrana e l’attivazione del complemento., Uno dei problemi più perplessi nell’identificazione di PNH è la variabilità nell’espressione di GPI, con conseguente pazienti che variano da lieve a grave soppressione della sintesi di GPI. L’uso della citometria a flusso per la rilevazione del legame CD55 ridotto è un modo per risolvere questo mosaicismo o espressione. In definitiva, il gene di routine e il sequenziamento dell’intero genoma possono portare a informazioni importanti riguardanti la PNH e la sua associazione con l’anemia aplastica.

Quali fattori, se presenti, potrebbero influenzare i risultati di laboratorio?, In particolare, il paziente prende farmaci-farmaci OTC o prodotti di erboristeria-che potrebbero influenzare i risultati di laboratorio?

A causa della rarità della EPN, molti errori sono correlati al test di pazienti per EPN che non sono stati accuratamente valutati per le eziologie più comuni della loro presentazione, sia che si tratti di malattia emolitica cronica o anemia da carenza di ferro. La maggior parte degli errori deriva da questa analisi clinica incompleta e si verifica nelle prime fasi della revisione clinica., Tutti i pazienti con la comparsa di anemia da carenza di ferro, ad esempio, devono essere accuratamente esaminati per le fonti di sanguinamento e valutati utilizzando standard CBC, differenziale e test di screening per l’anemia da carenza di ferro prima di proseguire il test PNH., Allo stesso modo, un paziente con malattia emolitica cronica devono essere attentamente esaminato per le precedenti trasfusioni, farmaco-indotta emolisi, e di altre malattie croniche cause di emolisi, prima di perseguire il più specifico PNH test

Dal momento che i test di screening per EPN (saccarosio lisi test di Ham test) si basano su materiali biologici da parte del paziente, rispetto alle normali cellule rosse del sangue, il test di necessità sono meno precisi e sono potenzialmente meno sensibili quando non eseguite correttamente. Questi risultati dei test sono qualitativi e basati sull’ispezione visiva., È importante valutare adeguatamente le provette di controllo per la mancanza di emolisi sia nel test di lisi del saccarosio che nel test di Ham. Pertanto, vale la pena di eseguire tali test presso un laboratorio di riferimento con esperienza nella standardizzazione di questi test.

La citometria a flusso è probabilmente il più preciso dei test disponibili per la PNH; tuttavia, anche la citometria a flusso presenta diversi problemi. Un problema è la misurazione dell ‘”assenza” del marcatore CD55. Dimostrare risultati negativi è sempre un’interpretazione più difficile per il patologo della citometria a flusso., Inoltre, il fatto che CD59 sia espresso a livelli otto volte inferiori a CD55 rende CD59 un indicatore di “back-up” inadeguato per la PNH.