Studijní předměty
ženy se rekrutovali z továrny v městském společenství Cuernavaca, 89 km jižně od Mexico City., Koncentrace hemoglobinu u všech žen v továrně byla stanovena ze vzorků krve prstů, následovaných vzorkem žilní krve pro stanovení sérového feritinu u neanemických žen. Celkem 20 neanemických žen s nízkou zásoby železa byli přijati na základě koncentrace hemoglobinu ⩾125 g/l a sérového feritinu koncentrace <25 µg/l. Kritéria pro vyloučení zahrnovala těhotenství a kojení, gastrointestinální nebo metabolické poruchy (zánětlivé onemocnění střev, chronický průjem, cystická fibróza), dalších chronických nemocí, a ti, kteří berou doplňky železa., Ve všech, 20 zdánlivě zdravých kojenců (ve věku 6-24 měsíců) a 20 zdravých dětí (ve věku 2-5 let) byli přijati od matky s adekvátní hladiny hemoglobinu. Subjekty a rodiče dětí byli plně informováni o cílech a postupech studia a byl získán písemný souhlas. Etický výbor Institutu Nacional de Salud Pública, Cuernavaca, Mexiko a Švýcarského federálního technologického institutu Zürich ve Švýcarsku přezkoumal a schválil protokol.,
velikost Vzorku
velikost Vzorku výpočty byly založeny na interindividuální a intraindividuální rozdíly ve vstřebávání železa, jak bylo pozorováno v předchozích studiích biologickou dostupnost železa u kojenců a malých dětí (Davidsson et al., 1994, 1997, 2000, 2004). Bylo odhadnuto, že 20 dětí by měla být minimální velikost vzorku detekovat 50% významný rozdíl v protokolu tím vstřebávání železa z aritmetický průměr základní vstřebávání železa o 7%, 90% výkonu, hladina významnosti 0,05 (nepárový t-test) a typu I míra chyb ve výši 5%., Tyto odhady předpokládaly pokles o 10% a naznačily, že k dokončení studií bude zapotřebí nejméně 20 subjektů v každé skupině.
návrh Studie
na Žen, kojenců a děti byly náhodně zařazeni tak, aby dostávali test jídlo buď s síran železnatý nebo barevných fumarát na po sobě jdoucích dnů. Testovací jídlo bylo podáváno jako snídaně po nočním půstu. Přijatelnost testovaného jídla byla potvrzena u každého dítěte a dítěte před zápisem do studie. Po úplném příjmu značeného jídla nebylo povoleno žádné jídlo ani pití po dobu 3 hodin., Kojenci a děti zůstaly pod přísným dohledem během a po zkušebním příjmu jídla.
celkem bylo 5 ml žilní krve odebráno do zkumavek léčených EDTA těsně před příjmem prvního testovacího jídla a znovu o 14 dní později. Vzorky krve byly analyzovány pro indikátory stavu železa (hemoglobin a sérový feritin) a izotopové složení železa. Tělesná hmotnost a výška byly měřeny v každém místě odběru krve.
zkušební jídlo
testovaným jídlem byl slazený nápoj z kukuřičného mléka založený na místním nápoji z kukuřičné mouky „atole“. Byl vyroben z odplyněné kukuřičné mouky (24.,7%), plnotučné sušené mléko (11.7%), ‚piloncillo‘ (pevné formě, nerafinovaný hnědý cukr; 63.5%) a čištěná voda (200 ml) bez jakékoli přidané železo nebo kyselina askorbová. Standardizovaný test jídel byly připraveny zejména pro studie z místně dostupných potravin, koupil ve velkém, s výjimkou kukuřičné mouky, degermed, která byla k dispozici v Mexiku a byl získán ze Švýcarska (Swiss Mlýn, Zurich, Švýcarsko). Degermovaná kukuřičná mouka byla použita k minimalizaci obsahu kyseliny fytové v mouce, což by jinak snížilo biologickou dostupnost železa ze zkušebního jídla (Hurrell et al., 2002)., Test jídlo bylo vařené v kuchyni zařízení a přepravovat horké krmení center v továrně, kde porce 220 g za ženu a 60 g na dítě a dítě byl připraven jako snídani a následoval příjem vody. Všechny tekutiny byly totožné, s výjimkou toho buď 4 mg, Fe (u žen) nebo 2,5 mg Fe (kojenci a děti) jako buď -železnatý fumarát nebo -síran železnatý, které byly přidány do testu jídlo těsně před podáváním. Prášek fumarátu železnatého byl přidán přímo do testovaného jídla a jako roztok byl přidán síran železnatý.,
Stabilní izotop štítky
značené isotopy -železnatý fumarát byl produkován Dr. Paul Lohmann GmbH (Emmerthal, Německo), ze obohacený elementárního železa pomocí zmenšil postup jejich ekvivalent komerční výrobní proces. Stejný postup byl použit pro předchozí studie (Davidsson et al., 2000, 2001, 2002; Fidler et al., 2003; Sarker et al., 2004). Jednotlivé dávky fumarátu železnatého byly předem zváženy do polyethylenových trubek, přičemž přesné přidané množství bylo určeno hmotností zkumavky a poté bylo uloženo., -síran železnatý byl připraven z isotopically obohacený elementární železo (Chemgas, Boulogne, Francie), který byl rozpuštěn v 0,1 mol H2SO4/l a doplní na odpovídající koncentraci. Roztok byl udržován pod argonovou atmosférou v polyethylenové láhvi, dokud nebylo potřeba, a před krmením byl zvážen do jednotlivých dávek.,
izotopové složení obou označení byla měřena ve třech vyhotoveních negativní tepelná ionizace hmotnostní spektrometrie pomocí magnetické sektorový hmotnostní spektrometr (MAT262; Finnigan MAT, Bremen, Německo), vybavený multi-sběratel systém Faraday poháry pro ion detekce. Koncentrace železa každého štítku byla měřena ve trojím vyhotovení inverzní analýzou izotopového ředění (Walczyk, 1997). Fumarát železnatý byl před izotopovým zředěním rozpuštěn v koncentrované kyselině dusičné., Železný standard přírodního izotopového složení byl připraven gravimetricky z izotopového referenčního materiálu (IRMM-014; E.u. Institut referenčních materiálů a měření, Geel, Belgie). Izotopové poměry byly měřeny zápornou tepelnou ionizační hmotnostní spektrometrií (Walczyk, 1997).
Izotopové složení vzorků krve
Obohacený celek-vzorky krve byly mineralizované mikrovlnnou digescí směs koncentrované HNO3 a H2O2 (30%) jako oxidační činidla., Železo bylo od matrice odděleno aniontovou výměnnou chromatografií a krokem extrakce kapalina-kapalina do diethyletheru (Walczyk et al., 1997). Chemické polotovary byly zpracovány v průběhu celého postupu. Izotopové složení separovaného železa bylo měřeno negativní tepelnou ionizační hmotnostní spektrometrií.
stav Železa
Čerstvě natažený celý-vzorky krve byly aliquoted pro měření koncentrace hemoglobinu pomocí přenosného HemoCue fotometr (Hemocue Inc., Angelholm, Švédsko) a standardizované techniky., Odpovídající materiál kontroly kvality byl analyzován na začátku každého dne odběru vzorků (Hemocue Inc., Angelholm, Švédsko). Alikvotní podíl z plné krve byla oddělena pro měření sérového feritinu automatizované imunoanalýzy (Immulite; DPC, Los Angeles, CA, USA) na ETH, Zurich, a zbývající krev byla zmrazena pro pozdější analýzu izotopového složení.,
Výpočet vstřebávání železa
množství 57Fe a 58Fe izotopové štítky v krvi, 14 dní po podání byly vypočteny na základě přechod z Fe izotopické poměry a odhadované množství cirkulujícího železa v těle. Výpočty byly založeny na principech izotopového ředění, s přihlédnutím k tomu, že izotopové štítky železa nebyly mono-izotopové. Cirkulující železo bylo vypočteno na základě objemu krve a koncentrace hemoglobinu. Výpočty objemu krve byly založeny na tělesné hmotnosti a výšce podle Brown et al. (1962) pro ženy a Linderkamp et al., (1977) pro děti. Pro výpočty frakční absorpce železa se u žen předpokládalo 80% začlenění absorbovaného železa do erytrocytů (Hosein et al ., 1967) a 90% pro děti (9). RBV železnatého fumarátu byla vypočtena pro každou sadu údajů.
Statistické analýzy
Frakční vstřebávání železa hodnoty jsou prezentovány ve formě aritmetických průměrů a s.d. Všechny statistické testy byly napájeny na 80% a provedeny s 95% intervalem spolehlivosti na log-transformovaných dat, jako vstřebávání železa hodnoty jsou normálně rozděleny., Pro porovnání údajů v každé věkové skupině byl použit spárovaný t-test studenta. RBV železnatého fumarátu mezi věkovými skupinami byla porovnána pomocí nepárového t-testu studenta. Statistická analýza výkonu byla provedena pomocí komerčního softwaru (StatMate 2; GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Lineární regrese byla použita pro vyhodnocení vztahu mezi vstřebávání železa a železo obchodech (zastoupená sérového feritinu) a Pearson korelace byl použit zkoumat vztah mezi sérového feritinu a RBV.