Etika
Tato studie byla provedena v souladu s předpisy Helsinské Deklarace (1964) a v souladu s Regionální Etické komise, Göteborgu.
psi
byli používáni dva psi, Hanna, 10letý knírač Černého obra (č. čipu., 96700000389928) a Lotti, 6letý černý obří knírač (č. čipu 098100311386). Majitel a psovod je GH. Psi žijí jako domácí mazlíčci s majitelem a jeho rodinou. K dispozici je volný přístup ke sladké vodě po celý den a krmení třikrát denně. Psi tráví několik hodin každý den na zahradě nebo na procházkách. Zdravotní kontroly jsou prováděny na veterinární klinice Värmdö v Gustavsbergu.
školení
tréninková metoda byla podrobně popsána jinde . Po dobu 2 let před touto studií byl použit pouze jednou týdně školení údržby., Každé z tréninků zahrnovalo 4-10 krabic, z nichž 0-3 obsahovalo rakovinovou tkáň nebo krev od pacientů s karcinomem vaječníků. Nastavení bylo náhodně vybráno před každou relací. Tento program umožnil psům čelit jinému problému, který je třeba vyřešit při každé tréninkové příležitosti. Psi byli odměněni pouze za správnou identifikaci. Pro trénink byly použity vzorky krve s hodnotami>500 U/ml CA-125 jako indikátor karcinomu vaječníků. Jedna kapka výcvikového vzorku byla umístěna v malé plastové misce uvnitř každé krabice., Vzorky krve použité během tréninkového období nebyly v testech použity. Psi byli v experimentu používáni se souhlasem regionální etické revizní rady v Göteborgu, licenční číslo: s-220-08. Psi měli volný přístup ke sladké vodě během tréninkových a testovacích hodin. Po 2 hodinách práce byli psi procházeni nebo měli 20 minut volného času.
výběr Pacientů
Pacienti byly vybrány pro zařazení do této retrospektivní studie z kliniky a bio-bank databází. Ten obsahuje krev a rakovinovou tkáň od pacientů s rakovinou vaječníků., Materiálu bylo odebráno po získání povolení od jednotlivých pacientů a je regulována program léčení rakoviny vaječníků v Západním Švédsku. Výběr pacienta byl nejprve proveden z databáze kliniky, poté byly výsledky korelovány s databází bio-bank, aby se získaly vzorky krve.
hlavním kritériem výběru aplikovaným na všechny pacienty ve studii byla klinická úplná remise (CR) před šestým (konečným) plánovaným chemoterapeutickým průběhem. Pacienti vybraní pro sérii I byli rozděleni do 3 skupin., Skupina A zahrnovala pacienty s 3 let relaps-free survival, Skupina B zahrnovala pacienty s relapsem do 6 měsíců po posledním ošetření. zasedání; a pro Skupiny C, včetně pacientů s relapsem mezi 1 a 2 let po léčbě. Celkem 66 pacientů s CR V letech 2001-2007 bylo vybráno v sérii 1. Všichni pocházeli z oblasti Göteborgu a byli také v databázi bio-bank. Čtyřicet dva pacientů mělo vzorky v biobance odpovídající jednomu ze tří sekundárních výběrových kritérií pro zařazení do skupiny A, B nebo C., Výběr pro sérii II byl proveden pouze pomocí databáze biobank.
vzorky krve
vzorky krve byly odebrány pacientům žijícím v oblasti Göteborgu v západním Švédsku. Počet obyvatel je asi 600 000. Léčebný program pro rakovinu vaječníků v vyžaduje CA-125 analýzu při dvou příležitostech. Za prvé, před nebo přímo po primárním chirurgickém zákroku a druhý před šestým průběhem léčby chemoterapií. Nicméně, jako obvykle v léčebném programu pro karcinom vaječníků, hladina CA-125 nebyla zahrnuta do sledování, i když lékaři mají možnost ji zkontrolovat., Vzorky krve s hodnotami>500 U/ml CA-125 byly použity pro výcvik psů, přičemž jedna kapka byla umístěna do malé plastové misky uvnitř každé krabice. Vzorky krve použité během tréninku nebyly v testech použity.
referenční vzorky krve
materiál pro referenční skupinu byl vybrán z databáze bio-bank. Klinikopatologické proměnné nebyly zváženy, protože naše předchozí výsledky studie ukázaly, že neovlivnily citlivost detekce psů ., Celkem 62 vzorků (42 pro Série i a 20 pro Series II), z různých jedinců, s CA-125 hodnoty >200 U/ml byly náhodně vybrány jako referenční materiál v Sérii i. a II.
Test krevní vzorky v Sérii
Čtyřicet dva vzorky byly shromažďovány a použity jako zkušební materiál v Série I. Tyto krevní vzorky byly odebrány před šestou chemoterapii. Pacienti byli rozděleni do tří skupin., Skupina se skládala ze 13 pacientů, kteří dosáhli CR, 3-rok relaps-free survival, a normální (<35 U/ml) CA-125values před jejich poslední léčby. Skupina B se skládala z 12 pacientů, kteří dosáhli CR, došlo k relapsu do 6 měsíců, a všechny kromě 2 (61 U/ml; <200 U/ml) měl CA-125 <35UI. Skupina C se skládala ze 17 pacientů s CR, recidivy mezi 1 a 2 lety a normálních hodnot CA-125. Histopatologie nádoru, stupeň a stupeň se v rámci skupin lišily.,
vzorky krve s hodnotami>500 U/ml CA-125 byly použity pro trénink, přičemž jedna kapka byla umístěna do malé plastové misky uvnitř každé krabice. Vzorky krve použité během tréninku nebyly v testech použity.
Test krevní vzorky v Sérii II
byly odebrány Vzorky 3 a 6 měsíců po šesté, poslední chemoterapie kurzu. Bohužel jsme nemohli sledovat pacienty v sérii I, skupina A, protože žádný z nich neměl krev v krevní bance. Odebrali jsme krev od dalších 10 pacientů, kteří byli pravidelně sledováni., Střední věk dárce byl 65 let (rozmezí, 38-78 let).
kontrolní vzorky krve
kontrolní vzorky byly odebrány během 2 let mezi lety 2007 a 2009, většinou od dobrovolnic ženského zdravotnického personálu v Göteborgu. Kritéria zahrnutí spočívala v tom, že se pacienti cítili zdravě, nebyli těhotní a neměli gynekologické onemocnění. Kontrolní a zkušební materiály nebyly přizpůsobeny věku. Mladší osoby byly vědomě vybrány jako zdroj kontrolních vzorků, aby se snížilo riziko přítomnosti asymptomatické rakoviny vaječníků., Kontrolní i testovací skupiny tedy měly vzorky od žen před a po menopauze.
příprava Vzorku
Krevní vzorky byly odebrány do EDTA zkumavky, a pak centrifugována při 3000 ot / min po dobu 10 min s plazmovou hrnce přes malé plastové trubky. Po odstředění byla plazma rozdělena na dvě části, jednu pro analýzu CA-125 a druhou pro následné experimenty. Druhá část byla udržována na -80°C v nádorové bance (licenční číslo Etického výboru: s-220-08, regionální Etická revizní Rada v Göteborgu)., Kontrolní vzorky plazmy byly zpracovány a uloženy shodně s cíli. Trubice s kontrolní krví však byly skladovány Samostatně. Střední věk dárce byl 45 let (rozmezí, 29-65 let).
návrh testu
testy byly provedeny dvojitě zaslepeným způsobem, jak bylo dříve popsáno . Abychom to shrnuli, vedoucí testu i psovod byli oslepeni umístěním cílových vzorků a byli přítomni na zkušebním místě pouze tehdy, když psi pracovali. Psi byli testováni ve dvou sériích. Série i pokrývala 4 dny (2 dny na příležitost), zatímco série II pokrývala 2 dny., Každý den bylo provedeno deset běhů, s výjimkou jednoho dne v sérii I, kdy bylo provedeno 11 běhů. Každý běh zahrnoval sedm krabic, umístěných v kruhu asi 2 m od sebe. Každá krabice obsahovala kapku plazmy; pět obsahovalo kontrolní materiály, jeden obsahoval zkušební vzorek a jeden obsahoval referenční vzorek. Referenční materiály byly odebrány před nebo krátce po primární operaci, a tak měly vysokou koncentraci molekul zápachu. Umístění cílových a referenčních polí bylo změněno asistentem mezi každým spuštěním. Každá krabice byla vyčištěna alkoholem mezi jízdami., Testy byly dokumentovány na papíře a DVD vedoucím testu a jedním asistentem .
Pes odpovědí
pozitivní odpověď byla definována jako označující pole cíl poškrábání s přední nohy, vleže a čichání (a ne s uvedením kontrolních vzorků). Negativní odpověď byla definována jako čichání a označování ovládací skříňky a neuvádění cíle. Nejistá odpověď byla definována jako zastavení u krabice, vůně, škrábání na to, a možná štěkání, ale jít rovně a ne vleže.,
Léčba ovariální karcinomy
V souladu s normou léčebný program v Západním Švédsku, pacienti byli léčeni po celkové hysterektomii, bilaterální adnexektomie, omentectomy, více peritoneální biopsie, a peritoneálním výplachu s cytologií. Přibližně 4 týdny po primární operaci byla podána první kombinace karboplatiny, cyklofosfamidu a epirubicinu. Celkem bylo podáno šest kurzů ve 4týdenních intervalech.,
Statistické metody
raw dat byly shrnuty jako citlivost (podmíněná pravděpodobnost psa označující rakovinu, když stav byl přítomen) a specifičnost testu (podmíněná pravděpodobnost psa ignoruje vzorek od zdravého dárce). Citlivost a specifičnost poskytují vhled do obecné klasifikační schopnosti psů.
byla také vypočtena pozitivní a negativní prediktivní pravděpodobnost, že test poskytne správnou diagnózu. Bodové odhady byly vypočteny s 95% intervaly spolehlivosti ., Jak citlivost, tak specificita byly vyjádřeny jako proporce, takže pro statistický závěr lze použít standardní techniky proporcí. Intervaly spolehlivosti byly založeny na normální aproximaci, p ± 1,96 p 1-p / n, kde p je odhadovaná citlivost, příslušná specificita a n je počet zkušebních jízd.