ORIGINAL RESEARCH
Serum b2-Mikroglobulinwerte bei gesunden Brasilianern mit einem DPC IMMULITE® Assay
Werte von b2-Mikroglobulin em brasileiros saudáveis mit oder automatisiertes System DPC IMMULITE®
Fabíola Branco Filippin; Liliete Canes Souza
Abteilung für klinische Analyse, Wissenschafts – und Gesundheitszentrum, Bundesuniversität Santa Catarina-Florianópolis/SC, Brasilien. E-mail: [email protected].,br
ABSTRACT
ZWECK: Die vorliegende Studie wurde entworfen, um den normalen Bereich der serum-beta-2-mikroglobulin (Sb2M) – Spiegel bei gesunden Freiwilligen in Brasilien. Die Sb2M-Spiegel sind bei HIV-infizierten Patienten (Human Immunodeficiency Virus) erhöht und es wurde gezeigt, dass sie der beste Prädiktor für den HIV-Infektionsstatus und einige maligne Erkrankungen, insbesondere das multiple Myelom, sind., Um seine optimale Anwendung in der brasilianischen klinischen Diagnose zu erreichen, wurde eine adäquate Referenzintervallstudie für den Sb2M IMMULITE® – Assay durchgeführt, basierend auf der Tatsache, dass seine Referenzbereichsgrenzen unter europäischen Populationen bewertet wurden.
METHODEN: Sechsundneunzig gesunde Blutspender wurden untersucht, und Sb2M-Spiegel wurden durch chemilumineszierende Enzymimmunoassay mit dem IMMULITE® automatisierten Analysator gemessen.
ERGEBNISSE: EINE normale Palette von Sb2M Werte, die durch eine nichtparametrische statistische Methode wurde von 1,05 3,9 mg/mL, mit der oberen Grenze höher als die gemeldeten woanders.,
SCHLUSSFOLGERUNGEN: Diese Studie präsentierte neue Daten, die darauf hindeuten, dass es einen signifikanten Unterschied zwischen den aktuellen Referenzgrenzen für Sb2M IMMULITE ® Assay und denen in Brasilien gefunden, Beweise dafür, dass signifikante Unterschiede im Bereich der Normalwerte zwischen verschiedenen Populationen auftreten können, und dass diese neuen Werte sollten für brasilianische Personen in Betracht gezogen werden.
Schlüsselwörter: b2-microglobulin. Referenzintervall. Chemilumineszenz-immunoassay. Gesunde Freiwillige. Prognostischer Wert.,
abstract
Ziel: das Ziel dieser Studie war es, festzustellen, baseline-Werte der serum-B2-mikroglobulin (Sb2M) in gesunden Freiwilligen. Es ist bekannt, dass dieser Parameter bei Patienten, die mit dem humanen Immunschwächevirus (HIV) infiziert sind, hoch ist und sich als besserer Marker für HIV-Infektionen und maligne Erkrankungen, insbesondere multiples Myelom, erwiesen hat., Um die beste klinische Diagnose zu erhalten, wurde mit dem IMMULITE® – Assay ein adäquater Referenzbereich von Sb2M für die brasilianische Population bestimmt; da dieser als Parameter einen Referenzbereich aus europäischen Populationen bestimmt.
Methoden: sechsundneunzig gesunde Blutspender wurden ausgewertet und Sb2M-Werte wurden durch chemilumineszierende Enzymimmunoassay-Methode mit IMMULITE®automated Analyzer gemessen.
Ergebnisse: die Werte der Sb2M, gegründet von nichtparametrische statistische Methode, wurden zwischen 1.05 und 3.,9 mg / ml, und die erhaltene Obergrenze war höher als in anderen Studien berichtet.
Schlussfolgerung: Diese Studie präsentierte neue Werte, was darauf hinweist, dass es einen signifikanten Unterschied zwischen den Referenzgrenzen von Sb2M für IMMULITE® und die in der vorliegenden Studie gefunden, was das Auftreten von wichtigen Variationen zwischen verschiedenen Populationen und dass neue Werte sollten für Brasilianer berücksichtigt werden.
Uniterms: B2-mikroglobulin. Referenzbereich. Chemilumineszenz-immunoassay. Gesunde Freiwillige. Prognostischer Wert.,
Beta 2-Mikroglobulin (b2M), ein Protein, das in allen nukleinierten Zellen vorkommt, ist mit Antigenen der Histokompatibilitätsklasse 1 auf Zelloberflächenmembranen assoziiert (besonders häufig auf Lymphozyten und Monozyten).1 Es wurde zuerst im Urin von Patienten mit Nierenversagen entdeckt.2 Aufgrund seines niedrigen Molekulargewichts (11.800 Dalton) werden 95% aller freien b2M im Plasma durch glomeruläre Filtration eliminiert und 99,9% davon von proximalen Röhrenzellen aufgenommen. In Gegenwart einer normalen Nierenfiltrationsrate weisen erhöhte Serum-b2M (Sb2M) – Spiegel auf eine hohe b2M-Produktion oder-Freisetzung hin3., Bei Aktivierung des Immunsystems setzen sowohl B – als auch T-Lymphozyten aktiv b2M in den Kreislauf frei, von wo es später über glomeruläre Filtration und tubuläre Reabsorption eliminiert wird.4 Erhöhte Sb2M-Konzentrationen wurden bei Patienten mit Blutzellendyskrasien gefunden, einschließlich Multiples Myelom, 5, 6 maligne lymphoproliferative Störungen,7 myeloproliferative Störungen, 8 bestimmte Virusinfektionen wie HIV-Infektions9, Cytomegalovirus, Nicht-A-und Nicht-B-Hepatitis und infektiöse Mononukleose.,10 Das Niveau von Sb2M wird auch als wichtiger prognostischer Faktor bei Patienten mit multiplen Myelomen5,6 und HIV-Infektionen verwendet.9
Der normale Referenzbereich für Sb2M bei gesunden Personen, der in der Literatur gefunden wurde, wurde unter Verwendung nordamerikanischer und europäischer Populationen (DPC Immulite® Assay) bestimmt. In einem Versuch, den normalen Bereich der Sb2M-Spiegel bei asymptomatischen seronegativen afrikanischen Individuen zu bestimmen, Piwowar et al. (1995) 10 stellte fest, dass 50% dieser Probanden abnormale Werte aufwiesen (Mittelwerte 2, 35 mg/ml). In einer anderen Studie betrug der mittlere Sb2M-Wert bei gesunden Freiwilligen 1, 36 mg / ml.,11 In diesem Bericht beschreiben wir Sb2M-Werte bei gesunden brasilianischen Probanden aus einer Gruppe von Blutspendern im Hämatologie-und Hämotherapiezentrum von Santa Catarina (HÄMOSC).
PROBANDEN
Blutspender, Männer und nichtschwangere Frauen im Alter von 25 bis 50 Jahren, wurden in die Studie einbezogen. Alle Personen wurden von HEMOSC einer klinischen Bewertung unterzogen, einschließlich Fragebögen und Screening-Labortests nach brasilianischen rechtlichen Kriterien. Alle Freiwilligen, die diese Kriterien erfüllten, gaben mündlich und schriftlich ihre Zustimmung, zusätzliche 5 ml Blut für den Untersuchungszweck entnehmen zu lassen., Das experimentelle Protokoll wurde vom Ethikkomitee des Universitätsklinikums Florianópolis der Bundesuniversität Santa Catarina genehmigt.
METHODEN
Vollblut wurde mit einem Vacutainer-System in 10-ml-Trockenröhrchen gesammelt und das Serum durch Zentrifugation abgetrennt. Um Lipidkomponenten zu eliminieren, wurden Serumproben 20 min lang bei 18000 g ultrazentrifugiert. Alle Blutproben wurden zwischen 14.00 und 18.00 Uhr entnommen und innerhalb von 5 h nach der Venipunktur weiterverarbeitet., Die Proben wurden 1-in-1 in b2MProbenverdünnungsmittel (IMMULITE® Beta-2 Microglobulin Kit, DPC, USA) gemäß den Anweisungen des Herstellers vorverdünnt und 5 ml wurden für das Assayverfahren benötigt. Sb2M wurde mit einem festphasigen chemilumineszierenden Enzymimmunoassay an 2 Standorten unter Verwendung des IMMULITE® Automated Analyzer (DPC, Los Angeles, USA) gemessen.
Statistische Analyse
In der Referenzbereichsstudie für den DPC IMMULITE® – Assay betrug der Mittelwert 1,26 mg / ml., Das National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) befasst sich mit der Verwendung von a priori und a posteriori Ausschluss Kriterien erhalten Sie eine gesunde Proben.12 Daher wurden alle Probanden mit Sb2M-Werten von mehr als 2,0 mg/ml klinisch auf Wertakzeptanz neu bewertet, um sicherzustellen, dass jedes Individuum „gesund“war. Die Daten wurden mit Microsoft Excel Software eingegeben und analysiert. Die Mittel-und Standardabweichungswerte wurden berechnet. Die 95th-Perzentil-Referenzbereiche wurden mit 2,5 und 97,5 Perzentilen bestimmt., Gemäß dem von den NCCLS empfohlenen Verfahren wurden die Beobachtungen nach der Größe geordnet, und die 2,5-und 97,5-Perzentile wurden als 0,025 (n + 1) bzw. 0,975 (n + 1) geordnete Beobachtungen erhalten (n= Probengröße). Wenn die geschätzten Rangwerte keine Ganzzahlen waren, wurde eine lineare Interpolation durchgeführt.12
ERGEBNISSE
Sechsundneunzig brasilianische Blutspender, 60 Männer und 36 Frauen mit einem Durchschnittsalter von 33 Jahren, wurden in die Studie einbezogen. Die Werte von Sb2M lagen zwischen 1,05 und 3,9 mg/ml, wie in Abbildung 1 gezeigt, und der Mittelwert betrug 2,46 mg / ml (Standardabweichung = 0,73)., Daher wurde unter Verwendung von 97,5 th Perzentil nach einer routinemäßigen nichtparametrischen Methode 12 3,9 mg / ml als obere Normalgrenze angesehen. Der Bereich eingerichtet wurde, 1.33.9 mg/mL.
DISKUSSION
Forscher weltweit haben die Nützlichkeit von Sb2M als zuverlässiger Faktor bei der Beurteilung des Fortschreitens der HIV-Infektion und des multiplen Myeloms berichtet.5-8, 10, 13 Bei HIV-infizierten Probanden scheint Sb2M ein besserer Prädiktor für den HIV-Infektionsstatus zu sein als CD4-Werte und auch ein besserer Prädiktor für das Überleben, wobei erhöhte Sb2M-Spiegel mit dem Fortschreiten der Krankheit verbunden sind.,10
Bei Patienten mit multiplem Myelom wurde über eine erhöhte Produktion und die daraus resultierende Freisetzung von Sb2M in Körperflüssigkeiten berichtet. Die Bedeutung dieser Daten für Kliniker beruht auf der Tatsache, dass Myelomplasmazellen Sb2M produzieren. Daher wird angenommen, dass Sb2M-Werte nicht nur die Größe, sondern auch die proliferative Aktivität der Myelomzellen13 anzeigen und als unspezifischer Faktor der Tumormasse akzeptiert werden können.5,6,13,14 Darüber hinaus wurde die prognostische Rolle von Sb2M bei anderen proliferativen Störungen von vielen Autoren bestätigt,7,14,15 erleichtern die klinische Beurteilung.,15 Andererseits wurde berichtet, dass bei Patienten mit niedriger glomerulärer Filtrationsrate die Sb2M-Spiegel erhöht wurden und Laborbefunde mit Vorsicht interpretiert werden sollten.6,7,13
Referenzintervalle werden klinisch zusammen mit zusätzlichen Informationen als Richtlinien für den Zustand des Patienten verwendet. Die vom Hersteller definierte Referenzbereichsstudie für IMMULITE® Sb2M (1,01,7 mg/ml, Mittelwert 1,26 mg/ml) wurde anhand von Serumproben von fast 800 erwachsenen Freiwilligen, einschließlich Männern und nichtschwangeren Frauen, im Alter von 20 bis 70 Jahren bestimmt., Die Probanden wurden anhand von Fragebögen ausgewählt. Die Proben wurden in Frankreich, Deutschland, den Niederlanden und Portugal entnommen und die erhaltenen Werte wurden nichtparametrisch analysiert. Die vorgeschlagene Obergrenze lag bei 1,7 mg/mL. Diese Werte sind möglicherweise nicht repräsentativ für brasilianische Personen. In Ermangelung angemessener Referenzbereichsgrenzen für Sb2M, die von einer brasilianischen Population abgeleitet wurden, verwendeten viele Forscher Daten von nordamerikanischen und europäischen Probanden, die Obergrenzen darstellten, die 2,3-mal niedriger waren als die in der vorliegenden Studie erhaltenen.,
Der NCCLS empfiehlt, nichtparametrische Referenzintervalle zu verwenden und die Stichprobengröße n sollte aus mindestens 120 Werten bestehen, um ein 95% – Referenzintervall, 2,5% – und 97,5% – Punkte der Verteilung12 zu berechnen. Diese Zahl ist die Mindestanzahl von Werten, die für den Aufbau der Konfidenzintervalle erforderlich sind und Informationen über die Genauigkeit der berechneten Referenzgrenzen liefern.
In dieser Studie wurden 96 Proben ausgewertet., Unser Ziel war es nicht, neue Referenzintervalle zu erzeugen, sondern uns mehr auf die Notwendigkeit zu konzentrieren, dass jedes Labor trotz vieler Schwierigkeiten, einschließlich praktischer und hoher Kosten, seine eigenen Referenzintervalle für alle Parameter erzeugt.
Die vorliegende Studie zeigt, dass in verschiedenen Populationen signifikant unterschiedliche Sb2M-Werte auftreten können, was darauf hindeutet, dass jedes brasilianische Labor seine eigenen Referenzgrenzen festlegen sollte.,
DANKSAGUNGEN
Wir danken dem Hämatologie-und Hämotherapiezentrum von Santa Catarina und dem Clinical Analysis Laboratory, Universitätsklinikum Florianópolis für die Proben und technische Unterstützung. Wir danken DPC IMMULITE® für die kostenlose Bereitstellung des Reagenziensets für diese Studie und Dr. Joanita Del Moral von der Abteilung Hämatologie am Universitätsklinikum Florianópolis.
2. Berggard ich & Bearn AG. Isolierung und Eigenschaften eines Beta-2-Globulins mit niedrigem Molekulargewicht, das in menschlichen biologischen Flüssigkeiten vorkommt., J Biol Chem 1968;243(15):4095-103.
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8. Rodriguez J, Cortes J, Talpaz M, O ‚ Brien S, Smith TL, Rios MB, et al., Serum-Beta-2-Mikroglobulinspiegel sind ein signifikanter prognostischer Faktor bei Philadelphia-Chomossom-positiver chronischer myeloischer Leukämie. Clin Cancer Res 2000;6:147-52.
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12., Nationales Komitee für klinische Laborstandards. So definieren und bestimmen Sie Referenzintervalle im klinischen Labor: zugelassene Richtlinie, NCCLS-Dokument C28-A und C28-A2, Villanova, PA, 1995, 2001, NCCLS.