subiecte de Studiu
femeile au fost recrutați dintr-o fabrică din comunitatea urbană din Cuernavaca, 89 km sud de Mexico City., Concentrația hemoglobinei la toate femeile din fabrică a fost determinată din probe de sânge cu degetul, urmată de o probă de sânge venos pentru a determina feritina serică la femeile neanemice. Un total de 20 de non-anemici femeile cu un nivel scăzut de fier au fost recrutați pe baza concentrației hemoglobinei ⩾125 g/l și concentrația feritinei serice <25 µg/l. Criteriile de excludere au inclus timpul sarcinii și alăptării, gastro-intestinale sau afecțiuni metabolice (boala inflamatorie a intestinului, diaree cronica, fibroza chistica), alte boli cronice și cei care au luat suplimente de fier., În total, 20 de sugari aparent sănătoși (cu vârste cuprinse între 6-24 luni) și 20 de copii aparent sănătoși (cu vârste cuprinse între 2-5 ani) au fost recrutați de la mame cu niveluri adecvate de hemoglobină. Subiecții și părinții copiilor au fost informați pe deplin cu privire la obiectivele și procedurile studiului și a fost obținut acordul scris. Comitetul de etică de la Instituto Nacional De Salud Pública, Cuernavaca, Mexic și Institutul Federal Elvețian de tehnologie, Zürich, Elveția au revizuit și au aprobat protocolul.,calculele mărimii probei s-au bazat pe variațiile interindividuale și intraindividuale ale absorbției fierului, așa cum s-a observat în studiile anterioare privind biodisponibilitatea fierului la sugari și copii mici (Davidsson et al., 1994, 1997, 2000, 2004). S-a estimat că 20 de copii ar fi o dimensiunea minimă a eșantionului pentru a detecta un 50% diferență semnificativă în jurnal înseamnă absorbtia de fier de la o medie aritmetică de bază fier de absorbție de 7%, cu 90% din putere, un nivel de semnificație de 0,05 (nepereche t-test) și o eroare de tipul I rata de 5%., Anticipând o rată de abandon de 10%, aceste estimări au indicat că cel puțin 20 de subiecți din fiecare grup ar fi necesari pentru finalizarea studiilor.
designul studiului
Femeile, sugarii și copiii au fost repartizați aleatoriu pentru a primi masa de testare fie cu sulfat feros, fie cu fumarat feros în zile consecutive. Masa de testare a fost administrată ca mic dejun după un post peste noapte. Acceptarea mesei de test a fost confirmată la fiecare Sugar și copil înainte de înscrierea în studiu. Nu au fost permise alimente sau băuturi timp de 3 ore după administrarea completă a mesei etichetate., Sugarii și copiii au rămas sub supraveghere atentă în timpul și după administrarea mesei de testare.
în total, 5 ml de sânge venos au fost extrase în tuburile tratate cu EDTA chiar înainte de administrarea primei mese de testare și din nou 14 zile mai târziu. Au fost analizate probe de sânge pentru indicatorii de stare a fierului (hemoglobină și feritină serică) și compoziția izotopică a fierului. Greutatea corporală și înălțimea au fost măsurate la fiecare punct de prelevare a sângelui.
masa de testare
masa de testare a fost o băutură îndulcită cu lapte de porumb, bazată pe băutura locală mexicană din făină de porumb „atole”. A fost făcută din făină de porumb degermată (24.,7%), întreg-lapte praf (11.7%), ‘piloncillo’ (o formă solidă de zahăr brun nerafinat; 63.5%) și apă purificată (200 ml), fără orice adaos de fier sau acid ascorbic. Mesele de testare standardizate au fost pregătite în special pentru studiu din alimentele disponibile local achiziționate în vrac, cu excepția făinii de porumb degermate care nu a fost disponibilă în Mexic și a fost obținută din Elveția (Swiss Mill, Zurich, Elveția). Făina de porumb degermată a fost utilizată pentru a minimiza conținutul de acid fitic al făinii, ceea ce ar reduce altfel biodisponibilitatea fierului din făina de testare (Hurrell et al., 2002)., Masa de testare a fost gătită într-o unitate de bucătărie și transportată la cald la Centrul de hrănire din fabrică, unde o porție de 220 g pe femeie și 60 g pe copil și copil a fost pregătită ca mic dejun și a fost urmată de aportul de apă. Toate mesele testate au fost identice, cu excepția adăugării fie a 4 mg Fe (femei), fie a 2,5 mg Fe (sugari și copii) ca fumarat feros sau sulfat feros, care au fost adăugate la masa testată imediat înainte de servire. Pulberea de fumarat feros a fost adăugată direct în masa de testare și s-a adăugat sulfat feros ca soluție.,
izotop Stabil etichetele
marcați izotopic -fumarat feros a fost produs de Dr. Paul Lohmann GmbH (Emmerthal, Germania) din îmbogățit fier elementar folosind un downscaled procedura de echivalentul lor comerciale procesul de fabricație. Aceeași procedură a fost utilizată și pentru studiile anterioare (Davidsson et al., 2000, 2001, 2002; Fidler și colab., 2003; Sarker și colab., 2004). Dozele individuale de fumarat feros au fost pre-cântărite în tuburi de polietilenă, prin care cantitatea exactă adăugată a fost determinată de greutatea tubului și apoi au fost depozitate., – sulfatul feros a fost preparat din fier elementar îmbogățit izotopic (Chemgas, Boulogne, Franța), care a fost dizolvat în 0,1 mol H2SO4/l și realizat până la concentrația corespunzătoare. Soluția a fost păstrată sub atmosferă de argon într-o sticlă de polietilenă până când este necesar și cântărită în doze individuale înainte de hrănire.,
compoziția izotopică de ambele etichete fost măsurate în trei exemplare de către negative spectrometrie de masă cu ionizare termică folosind un câmp magnetic sector spectrometru de masă (MAT262; Finnigan MAT, Bremen, Germania) echipat cu un multi-sistem colector de Faraday cupe pentru ion detectare. Concentrația de fier a fiecărei etichete a fost măsurată în trei exemplare prin analiza de diluție izotopică inversă (Walczyk, 1997). Fumaratul feros a fost dizolvat în acid azotic concentrat înainte de diluarea izotopică., Fier standard de compoziție izotopică naturală a fost pregătit gravimetric de la o izotopică a materialului de referință (IRMM-014; E. U. Institutul pentru Materiale de Referință și Măsurători, Geel, Belgia). Raporturile izotopice au fost măsurate prin spectrometrie de masă cu ionizare termică negativă (Walczyk, 1997).
compoziția izotopică a probelor de sânge
probele de sânge integral îmbogățit au fost mineralizate prin digestia cu microunde folosind un amestec de HNO3 concentrat și H2O2 (30%) ca agenți oxidanți., Fierul a fost separat de matrice prin cromatografie de schimb de anioni și printr–o etapă de extracție lichid-lichid în eter dietilic (Walczyk et al., 1997). Semifabricatele chimice au fost prelucrate pe tot parcursul procedurii. Compoziția izotopică a fierului separat a fost măsurată prin spectrometrie de masă cu ionizare termică negativă.
statutul de Fier
Proaspăt trase întreg-probele de sânge au fost aliquoted pentru măsurarea concentrației hemoglobinei folosind un portabil HemoCue fotometru (Hemocue Inc., Angelholm, Suedia) și tehnici standardizate., Materialul corespunzător de control al calității a fost analizat la începutul fiecărei zile de eșantionare (Hemocue Inc., Angelholm, Suedia). O alicotă de sânge integral a fost separată pentru măsurătorile feritinei serice prin imunotest automat (Immulite One; DPC, Los Angeles, CA, SUA) la ETH, Zurich, iar sângele integral rămas a fost înghețat pentru analiza ulterioară a compoziției izotopice.,
Calculul absorbtia de fier
sumele de 57Fe și 58Fe izotopice etichete în sânge, după 14 zile de administrare, au fost calculate pe trecerea de Fe rapoartele izotopice și valoarea estimată a circula fier în organism. Calculele s-au bazat pe principiile diluării izotopice, având în vedere că etichetele izotopice de fier nu erau mono-izotopice. Fierul circulant a fost calculat pe baza volumului sanguin și a concentrației de hemoglobină. Calculele volumului de sânge s-au bazat pe greutatea corporală și înălțimea conform Brown et al. (1962) pentru femei și Linderkamp și colab., (1977) pentru copii. Pentru calculele absorbției fracționate a fierului, s-a presupus încorporarea în proporție de 80% a fierului absorbit în eritrocite pentru femei (Hosein et al., 1967) și 90% pentru copii (9). RBV de fumarat feros a fost calculat pentru fiecare set de date.
analiza Statistică
Fracționată absorbtia fierului valorile sunt prezentate ca medie geometrică și s.d. Toate testele statistice au fost alimentate la 80% și a efectuat cu interval de încredere 95% pe log-transformat de date, ca absorbtia de fier valorile nu sunt normal distribuite., Testul t asociat al elevului a fost utilizat pentru a compara datele din fiecare grupă de vârstă. RBV de fumarat feros între grupele de vârstă a fost comparat folosind testul t nepereche al elevului. Analiza statistică a puterii a fost realizată folosind software-ul comercial (StatMate 2; GraphPad Software Inc., San Diego, CA, SUA). Regresia liniară a fost utilizată pentru a evalua relația dintre absorbția fierului și depozitele de fier (reprezentate de feritina serică), iar corelația lui Pearson a fost utilizată pentru a examina relația dintre feritina serică și RBV.