Etică
Acest studiu a fost efectuat în conformitate cu reglementările din Declarația de la Helsinki (1964) și în conformitate cu legea Regională Comitetul de Etică, Gothenburg.
câini
au fost folosiți doi câini, Hanna, un Schnauzer gigant negru de 10 ani (cip nr., 967000000389928), și Lotti, un Schnauzer gigant negru în vârstă de 6 ani (nr. Proprietarul și handler-ul este Gh. Câinii trăiesc ca animale de companie de familie cu proprietarul și familia sa. Există acces GRATUIT la apă dulce toată ziua și hrănire de trei ori pe zi. Câinii petrec câteva ore în fiecare zi într-o grădină sau pe plimbări. Controalele de sănătate se fac la Clinica de animale Värmdö, Gustavsberg.metoda de antrenament a fost descrisă în detaliu în altă parte . Timp de 2 ani înainte de prezentul studiu, a fost utilizat doar o dată pe săptămână de formare de întreținere., Fiecare dintre sesiunile de formare a inclus 4-10 cutii, dintre care 0-3 conținea țesut canceros sau sânge de la pacienții cu carcinom ovarian. Configurarea a fost selectată aleatoriu înainte de fiecare sesiune. Acest program a permis câinilor să se confrunte cu o problemă diferită de rezolvat în fiecare ocazie de antrenament. Câinii au fost recompensați doar pentru o identificare corectă. Probele de sânge cu valori >500 U/ml CA-125 ca indicator al carcinomului ovarian au fost utilizate pentru instruire. O picătură din proba de antrenament a fost plasată într-un vas mic de plastic în interiorul fiecărei cutii., Probele de sânge utilizate în timpul perioadei de antrenament nu au fost utilizate în teste. Câinii au fost folosiți în experiment cu permisiunea Consiliului Regional de revizuire etică din Gothenburg, numărul licenței: S-220-08. Câinii au avut acces liber la apă dulce în timpul orelor de antrenament și testare. După 2 ore de muncă, câinii au fost plimbați sau au avut 20 de minute de timp liber.
selecția pacienților
pacienții au fost selectați pentru a fi incluși în acest studiu retrospectiv din bazele de date clinice și bio-bancare. Acesta din urmă conține sânge și țesut de cancer de la pacienții cu cancer ovarian., Materialul a fost colectat după obținerea permisiunii de la pacientul individual și a fost reglementat de programul de tratament pentru cancerul ovarian din vestul Suediei. Selectarea pacienților a fost făcută mai întâi din Baza de date a clinicii, apoi rezultatele au fost corelate cu baza de date bio-bancară pentru a obține probe de sânge.criteriul principal de selecție aplicat tuturor pacienților din studiu a fost remisia clinică completă (RC) înainte de a șasea (finală) chimioterapie programată. Pacienții selectați pentru Seria I au fost împărțiți în 3 grupe., Grupul A, a inclus pacienți cu 3 ani de supraviețuire fără recădere, grupul B a inclus pacienți care au recidivat în decurs de 6 luni de la ultima ședință de tratament; iar pentru Grupul C a inclus pacienți care au recidivat între 1 și 2 ani după tratament. Un total de 66 de pacienți cu CR în anii 2001-2007 au fost selectați în Seria 1. Toate au fost din zona Gothenburg și au fost, de asemenea, în baza de date bio-bank. Patruzeci și doi de pacienți au avut probe într-un biobank corespunzător unuia dintre cele trei criterii secundare de selecție pentru includerea în grupa A, B sau C., Selecția pentru Seria A II-a a fost făcută numai folosind baza de date biobank.
probele de sânge
probele de sânge au fost colectate de la pacienții care trăiesc în zona Gothenburg din vestul Suediei. Populația este de aproximativ 600.000. Programul de tratament pentru cancerul ovarian necesită o analiză CA-125 în două ocazii. În primul rând, înainte sau imediat după intervenția chirurgicală primară, iar al doilea înainte de al șaselea ciclu de tratament cu chimioterapie. Cu toate acestea, ca de obicei în programul de tratament pentru carcinomul ovarian, nivelul CA-125 nu a fost inclus în urmărire, deși medicii au opțiunea de a verifica., Probele de sânge cu valori > 500 U/ml CA-125 au fost utilizate pentru antrenamentul câinilor, o picătură fiind plasată într-un vas mic de plastic în interiorul fiecărei cutii. Probele de sânge utilizate în timpul perioadei de antrenament nu au fost utilizate în teste.
probele de sânge de referință
materialul pentru grupul de referință a fost selectat din Baza de date bio-bank. Variabilele clinicopatologice nu au fost luate în considerare deoarece rezultatele studiului nostru anterior au arătat că acestea nu au afectat sensibilitatea de detectare a câinilor ., Un total de 62 de probe (42 pentru Seria I și 20 pentru Seria a II-a), de la persoane diferite, cu CA-125 valori >200 U/ml au fost selectate aleatoriu ca material de referință în Seria I și a II-a.
Test probe de sânge în Seria I
Patruzeci și două probe au fost colectate și utilizate ca material de testare în Seria I. Aceste probe de sânge au fost luate înainte de cea de-a șasea curs de chimioterapie. Pacienții au fost împărțiți în trei grupe., Un grup a constat din 13 pacienți care au avut un CR, 3 ani fără recidivă de supraviețuire, și normal (<35 U/ml) AC-125values înainte de ultimul lor curs de tratament. Lotul B format din 12 pacienți care au avut un CR, a recidivat în termen de 6 luni, și toate, cu excepția 2 (61 U/ml; <200 U/ml) a CA-125 <35UI. Grupul C a constat din 17 pacienți cu CR, recurență între 1 și 2 ani și valori normale CA-125. Histopatologia tumorii, stadiul și gradul au variat în cadrul grupurilor.,
probele de sânge cu>500 U / ml CA-125 au fost utilizate pentru antrenament, o picătură fiind plasată într-un vas mic de plastic în interiorul fiecărei cutii. Probele de sânge utilizate în timpul perioadei de antrenament nu au fost utilizate în teste.
probele de sânge testate în Seria II
probele au fost prelevate la 3 și 6 luni după al șaselea ciclu de chimioterapie final. Din păcate, nu am putut urmări pacienții din seria I, Grupa A, deoarece niciunul dintre ei nu avea sânge în banca de sânge. Am colectat sânge de la alți 10 pacienți care au fost urmăriți în mod regulat., Vârsta mediană a donatorului a fost de 65 de ani (Interval, 38-78 ani).
probele de sânge de Control
probele de Control au fost colectate pe parcursul celor 2 ani între 2007 și 2009, în mare parte de la voluntari de sex feminin din Gothenburg. Criteriile de includere au fost că pacientele se simțeau sănătoase, nu erau însărcinate și nu aveau boli ginecologice. Materialele de Control și testare nu au fost potrivite vârstei. Persoanele mai tinere au fost alese în mod conștient ca sursă de probe de control pentru a reduce riscul prezenței asimptomatice a cancerului ovarian., Astfel, atât grupurile de control, cât și cele de testare au avut probe de la femei pre-și postmenopauză.
pregătirea probei
probele de sânge au fost colectate în tuburi EDTA și apoi centrifugate la 3000 rpm timp de 10 minute cu vase de plasmă peste tuburile mici de plastic. După centrifugare, plasma a fost împărțită în două părți, una pentru analiza CA-125 și cealaltă pentru experimente ulterioare. Ultima parte a fost menținută la -80°C în banca tumorală (numărul licenței Comitetului Etic: S-220-08, Consiliul Regional de revizuire etică din Gothenburg)., Probele de plasmă de Control au fost prelucrate și stocate identic cu țintele. Cu toate acestea, tuburile cu sânge de control au fost depozitate separat. Vârsta mediană a donatorului a fost de 45 de ani (Interval, 29-65 ani).
proiectarea testului
testele au fost efectuate în mod dublu-orb, așa cum s-a descris anterior . Pentru a rezuma, atât liderul de testare, cât și manipulatorul au fost orbiți de locația probelor țintă și au fost prezenți în locația de testare numai atunci când câinii lucrau. Câinii au fost testați în două serii. Seria I a acoperit 4 zile (2 zile pe ocazie), în timp ce Seria II a acoperit 2 zile., Zece runde au fost efectuate în fiecare zi, cu excepția unei zile din seria I când au fost efectuate 11 runde. Fiecare rulare a inclus șapte cutii, plasate într-un cerc de aproximativ 2 m unul de celălalt. Fiecare cutie conținea o picătură de plasmă; cinci conțineau materiale de control, una conținea o probă de testare și una conținea o probă de referință. Materialele de referință au fost luate înainte sau la scurt timp după operația primară și astfel au avut o concentrație ridicată de molecule de miros. Plasarea cutiilor țintă și de referință a fost modificată de un asistent între fiecare rulare. Fiecare cutie a fost curățată cu alcool între runde., Testele au fost documentate pe hârtie și DVD de către liderul testului și un asistent .un răspuns pozitiv a fost definit ca indicând caseta țintă prin zgârierea cu piciorul anterior, culcat și adulmecând-o (și fără a indica probele de control). Un răspuns negativ a fost definit ca sniffing și indicând o cutie de control și nu indică ținta. Un răspuns incert a fost definit ca oprindu-se la cutie, mirosind-o, zgâriind-o și, eventual, lătrând, dar mergând direct și nu culcat.,în conformitate cu programul standard de tratament din vestul Suediei, pacienții au fost tratați prin histerectomie totală, salpingo-ovarectomie, omentectomie, biopsii peritoneale multiple și spălări peritoneale cu citologie. La aproximativ 4 săptămâni după intervenția chirurgicală primară, s-a administrat prima combinație de carboplatină, ciclofosfamidă și epirubicină. Un total de șase Cure au fost administrate la intervale de 4 săptămâni.,
metode statistice
datele brute au fost rezumate ca sensibilitate (probabilitatea condiționată a câinelui care indică cancer atunci când starea a fost prezentă) și Specificitatea testului (probabilitatea condiționată a câinelui ignorând o probă de la un donator sănătos). Sensibilitatea și specificitatea oferă o perspectivă asupra capacității generale de clasificare a câinilor.au fost calculate și probabilitatea predictivă pozitivă și negativă ca testul să dea diagnosticul corect. Estimările punctuale au fost calculate cu intervale de încredere de 95%., Atât sensibilitatea, cât și specificitatea au fost exprimate ca proporții, astfel tehnicile standard pentru proporții ar putea fi aplicate pentru inferența statistică. Intervalele de încredere s − au bazat pe aproximarea normală, p ± 1,96 p 1-p / n unde p este sensibilitatea estimată, specificitatea respectivă și n este numărul de încercări.