Etyka
badanie to zostało przeprowadzone zgodnie z przepisami deklaracji Helsińskiej (1964) i jest zgodne z Regionalną komisją etyki, Göteborg.
psy
użyto dwóch psów, 10-letniego sznaucera olbrzymiego czarnego (nr Chipa, 967000000389928) oraz Lotti, 6-letni czarny Sznaucer olbrzym (nr chip 098100311386). Właścicielem i opiekunem jest GH. Psy żyją jako zwierzęta rodzinne z właścicielem i jego rodziną. Jest bezpłatny dostęp do świeżej wody przez cały dzień, a karmienie trzy razy dziennie. Psy spędzają kilka godzin dziennie w ogrodzie lub na spacerach. Kontrole sanitarne przeprowadzane są w klinice dla zwierząt Värmdö, Gustavsberg.
Szkolenie
metoda szkolenia została szczegółowo opisana gdzie indziej . Przez 2 lata poprzedzające niniejsze badanie stosowano tylko raz w tygodniu szkolenie w zakresie konserwacji., Każda z sesji treningowych zawierała 4-10 pudełek, z których 0-3 zawierały tkankę nowotworową lub krew pacjentów z rakiem jajnika. Konfiguracja była wybierana losowo przed każdą sesją. Program ten pozwolił psom zmierzyć się z innym problemem do rozwiązania w każdej okazji szkolenia. Psy były nagradzane tylko za poprawną identyfikację. Do treningu wykorzystano próbki krwi z wartościami CA-125 o wartości >500 j./ml jako wskaźnikiem raka jajnika. Jedna kropla próbki treningowej została umieszczona w małym plastikowym naczyniu wewnątrz każdego pudełka., Próbki krwi wykorzystane w okresie szkolenia nie zostały wykorzystane w badaniach. Psy zostały użyte w eksperymencie za zgodą Regionalnej Komisji Oceny etycznej w Göteborgu, numer licencji: S-220-08. Psy miały swobodny dostęp do słodkiej wody w godzinach treningu i testów. Po 2 godzinach pracy psy były wyprowadzane lub miały 20 minut wolnego czasu.
wybór pacjenta
pacjenci zostali wybrani do włączenia do tego retrospektywnego badania z baz danych kliniki i biobanku. Ten ostatni zawiera krew i tkankę nowotworową od pacjentów z rakiem jajnika., Materiał został zebrany po uzyskaniu zgody indywidualnego pacjenta i był regulowany przez program leczenia raka jajnika w zachodniej Szwecji. Najpierw dokonano selekcji pacjentów z bazy danych kliniki, następnie wyniki zostały skorelowane z bazą biobankową w celu uzyskania próbek krwi.
głównym kryterium selekcji stosowanym u wszystkich badanych pacjentów była całkowita remisja kliniczna (CR) przed szóstym (ostatnim) planowanym cyklem chemioterapii. Pacjenci zakwalifikowani do serii I zostali podzieleni na 3 grupy., Grupa A, obejmująca pacjentów z 3-letnim okresem przeżycia bez nawrotu choroby, grupa B obejmowała pacjentów, u których wystąpił nawrót choroby w ciągu 6 miesięcy po ostatniej sesji leczenia, a w grupie C-pacjentów, u których wystąpił nawrót choroby w okresie od 1 do 2 lat po leczeniu. W latach 2001-2007 do pierwszej serii zakwalifikowano 66 pacjentów z CR. Wszystkie pochodziły z okolic Göteborga i znajdowały się również w bazie danych biobanku. Czterdziestu dwóch pacjentów miało próbki w biobanku odpowiadającym jednemu z trzech kryteriów selekcji wtórnej w celu włączenia do grupy A, B lub C., Wyboru do II serii dokonano wyłącznie w bazie biobanku.
próbki krwi
pobrano od pacjentów mieszkających w Göteborgu w zachodniej Szwecji. Populacja wynosi około 600 tys. Program leczenia raka jajnika wymaga analizy CA-125 dwukrotnie. Po pierwsze, przed lub bezpośrednio po operacji podstawowej, a drugi przed szóstym cyklu chemioterapii leczenia. Jednak, jak zwykle w programie leczenia raka jajnika, poziom CA-125 nie został włączony do obserwacji, chociaż lekarze mają możliwość sprawdzenia go., Próbki krwi o wartości>500 U/ml CA-125 zostały użyte do tresury psów, z jedną kroplą umieszczoną w małym plastikowym naczyniu wewnątrz każdego pudełka. Próbki krwi wykorzystane w okresie szkolenia nie zostały wykorzystane w badaniach.
próbki krwi referencyjnej
materiał dla grupy referencyjnej wybrano z bazy danych biobanku. Zmienne kliniczne nie były brane pod uwagę, ponieważ nasze poprzednie wyniki badań wykazały, że nie wpływają one na czułość wykrywania psów ., Ogółem 62 próbki (42 Dla Serii I i 20 dla serii II), od różnych osób, o wartości CA-125 >200 J./ml zostały losowo wybrane jako materiał odniesienia w serii I I II.
próbki krwi w serii i
Pobrano czterdzieści dwie próbki i wykorzystano je jako materiał badawczy w serii I. próbki krwi zostały pobrane przed szóstym cyklem chemioterapii. Pacjentów podzielono na trzy grupy., Grupa A składała się z 13 pacjentów z CR, 3-letnim okresem przeżycia bez nawrotu choroby i prawidłowymi wartościami CA-125 (<35 J./ml) przed ostatnim cyklem leczenia. Grupa B składała się z 12 pacjentów z nawrotem CR w ciągu 6 miesięcy, a wszyscy z wyjątkiem 2 (61 J./ml; <200 J./ml) mieli CA-125 <35UI. Grupa C składała się z 17 pacjentów z CR, nawrotami w okresie od 1 do 2 lat i prawidłowymi wartościami CA-125. Histopatologia nowotworu, stopień zaawansowania i stopień zróżnicowania w poszczególnych grupach.,
próbki krwi o wartości>500 U / ml CA-125 zostały użyte do treningu, z jedną kroplą umieszczoną w małym plastikowym naczyniu wewnątrz każdego pudełka. Próbki krwi wykorzystane w okresie szkolenia nie zostały wykorzystane w badaniach.
próbki krwi z serii II
Pobrano 3 i 6 miesięcy po szóstym, ostatnim cyklu chemioterapii. Niestety nie mogliśmy śledzić pacjentów z serii i, grupy A, ponieważ żaden z nich nie miał krwi w banku krwi. Pobraliśmy krew od 10 innych pacjentów, którzy byli regularnie obserwowani., Mediana wieku dawcy wynosiła 65 lat (zakres: 38-78 lat).
próbki kontrolne krwi
próbki kontrolne pobrano w ciągu dwóch lat między 2007 a 2009 r., głównie od wolontariuszek personelu medycznego z Göteborga. Kryteria włączenia były takie, że pacjenci czuli się zdrowi, nie byli w ciąży i byli wolni od chorób ginekologicznych. Materiały kontrolne i testowe nie były dopasowane do wieku. Młodsze osoby zostały świadomie wybrane jako źródło próbek kontrolnych w celu zmniejszenia ryzyka wystąpienia bezobjawowego raka jajnika., Tak więc zarówno w grupie kontrolnej, jak i w grupie badanej pobrano próbki od kobiet przed i po menopauzie.
przygotowanie próbki
próbki krwi pobierano w probówkach EDTA, a następnie odwirowywano przy 3000 obr. / min przez 10 min za pomocą pojemników plazmowych nad małymi plastikowymi probówkami. Po odwirowaniu Plazma została podzielona na dwie części, jedną do analizy CA-125, a drugą do kolejnych eksperymentów. Ta ostatnia część była przechowywana w temperaturze -80°C w banku nowotworów (numer licencji Komitetu etycznego: S-220-08, Regionalna Rada ds. etyki w Göteborgu)., Próbki plazmy kontrolnej były przetwarzane i przechowywane identycznie jak cele. Jednak probówki z krwią kontrolną były przechowywane oddzielnie. Mediana wieku dawcy wynosiła 45 lat (zakres 29-65 lat).
projektowanie testów
testy przeprowadzono w sposób podwójnie zaślepiony, jak wcześniej opisano . Podsumowując, zarówno prowadzący, jak i prowadzący badania byli ślepi na lokalizację próbek docelowych i byli obecni w miejscu badania tylko wtedy, gdy psy pracowały. Psy były testowane w dwóch seriach. Seria I obejmowała 4 dni (2 dni na każdą okazję), natomiast Seria II obejmowała 2 dni., Każdego dnia przeprowadzono dziesięć biegów, z wyjątkiem jednego dnia w serii I, kiedy przeprowadzono 11 biegów. Każdy bieg składał się z siedmiu pudeł, umieszczonych w okręgu oddalonym od siebie o około 2 m. Każde pudełko zawierało kroplę plazmy; pięć zawierało materiały kontrolne, jedna zawierała próbkę testową, a jedna zawierała próbkę referencyjną. Materiały referencyjne zostały pobrane przed lub krótko po operacji podstawowej, a tym samym miały wysokie stężenie cząsteczek zapachowych. Rozmieszczenie pól celowniczych i referencyjnych było zmieniane przez asystenta między każdym biegiem. Każda skrzynka była czyszczona alkoholem między biegami., Testy zostały udokumentowane na papierze i DVD przez lidera testu i jednego asystenta .
reakcje psów
pozytywna odpowiedź została zdefiniowana jako wskazanie pola docelowego przez drapanie przednią nogą, leżenie i wąchanie go (i nie wskazywanie próbek kontrolnych). Odpowiedź negatywna została zdefiniowana jako sniffing i wskazując skrzynkę kontrolną, a nie wskazując cel. Niepewna odpowiedź została zdefiniowana jako zatrzymanie się przy pudełku, wąchanie go, drapanie i prawdopodobnie szczekanie, ale idąc prosto i nie leżąc.,
leczenie raka jajnika
zgodnie ze standardowym programem leczenia w zachodniej Szwecji pacjenci byli leczeni histerektomią całkowitą, obustronną salpingo-jajowodową, omentektomią, wielokrotnymi biopsjami otrzewnowymi i płukaniem otrzewnowym cytologią. Około 4 tygodnie po pierwszym zabiegu chirurgicznym podano pierwsze skojarzenie karboplatyny, cyklofosfamidu i epirubicyny. Łącznie podawano sześć kursów w odstępach 4-tygodniowych.,
Metody statystyczne
surowe dane podsumowano jako czułość (prawdopodobieństwo warunkowe psa wskazującego na raka, gdy stan był obecny) i swoistość testu (prawdopodobieństwo warunkowe psa ignorującego próbkę od zdrowego dawcy). Czułość i swoistość dają wgląd w ogólną zdolność klasyfikacyjną psów.
obliczono również dodatnie i ujemne prawdopodobieństwo predykcyjne, że test da prawidłową diagnozę. Szacunki punktowe obliczono z 95% przedziałem ufności ., Zarówno czułość, jak i swoistość zostały wyrażone jako proporcje, w ten sposób można było zastosować standardowe techniki proporcji do wnioskowania statystycznego. Przedziały ufności opierały się na normalnym przybliżeniu, p ± 1,96 p 1 − p / n, gdzie p to Szacunkowa czułość, odpowiednia swoistość, A n to liczba przebiegów badania.