ORIGINAL RESEARCH
Serum b2-microglobulin values among healthy Brazilians using a DPC IMMULITE® assay
Wartości b2-dodatkowa punktu dostępu: brasileiros em saudáveis za pomocą automatycznego systemu DPC IMMULITE®
Fabíola Branco Filippin; Liliete Psów Souza
Department of Clinical Analysis, Science and Health Center, Federal University of Santa Catarina – Florianópolis/SC, Brazil. E-mail: [email protected].,br
streszczenie
Cel badania: celem niniejszego badania było określenie prawidłowego zakresu stężenia beta 2-mikroglobuliny (sb2m) w surowicy krwi u zdrowych ochotników w Brazylii. Poziom Sb2M jest podwyższony u pacjentów zakażonych ludzkim wirusem niedoboru odporności (HIV) i wykazano, że jest najlepszym wskaźnikiem stanu zakażenia HIV i niektórych chorób złośliwych, zwłaszcza szpiczaka mnogiego., W celu osiągnięcia optymalnego zastosowania w brazylijskiej diagnostyce klinicznej przeprowadzono odpowiednie badanie odstępu odniesienia dla testu SB2M IMMULITE®, opierając się na ocenie granic zakresu odniesienia wśród populacji europejskich.
metody: oceniono 96 zdrowych dawców krwi, a poziomy Sb2M mierzono za pomocą chemiluminescencyjnego enzymatycznego testu immunologicznego przy użyciu zautomatyzowanego analizatora IMMULITE®.
wyniki: normalny zakres wartości Sb2M, ustalony nieparametryczną metodą statystyczną, wynosił od 1,05 do 3,9 mg / mL, przy czym górna granica była wyższa niż podana gdzie indziej.,
wnioski: w tym badaniu przedstawiono nowe dane wskazujące, że istnieje znacząca różnica między obecnymi wartościami referencyjnymi dla testu SB2M IMMULITE® a wartościami znajdowanymi w Brazylii, dostarczając dowodów na to, że mogą wystąpić znaczące różnice w zakresie wartości normalnych między różnymi populacjami i że te nowe wartości należy uwzględnić w przypadku osobników Brazylijskich.
słowa kluczowe: B2-mikroglobulina. Interwał odniesienia. Chemiluminescencyjny test immunologiczny. Zdrowi ochotnicy. Wartość prognostyczna.,
abstrakcyjny
cel: Celem niniejszego badania było określenie wartości atrakcji, B2-Microglobulina w surowicy (Sb2M) u zdrowych ochotników. Wiadomo, że taki parametr jest wysoki u pacjentów zakażonych ludzkim wirusem niedoboru odporności (HIV) i, jak wykazano przez najlepszego strzelca zakażenia HIV i zaburzeń złośliwych, zwłaszcza szpiczaka mnogiego., Aby uzyskać najlepszą diagnozę kliniczną, przedział referencyjny odpowiadający sb2m dla populacji brazylijskiej określono za pomocą testu IMMULITE®; już, że tym razem ma jako parametr zakres atrakcji, określa się populacjami europejskimi.
metody: oceniono dziewięćdziesięciu sześciu zdrowych dawców krwi, a wartości Sb2M zmierzono metodą enzymatycznego testu immunologicznego quimiluminescente za pomocą zautomatyzowanego analizatora IMMULITE®.
wyniki: wartości sb2m ustalonych metodą statystyczną, nie parametryczną, przedstawiono między 1.05 a 3.,9 mg / ml, a górna granica uzyskana była większa niż w innych pracach.
wniosek :niniejsze badanie przedstawiło nowe wartości, wskazując, że istnieje znacząca różnica między granicami odniesienia Sb2M dla IMMULITE® i znaleźć w tej pracy; występowanie ważne zmiany wśród różnych grup ludności, a nowe wartości powinny być brane pod uwagę dla Brazylijczyków.
Unitermos: b2microglobulina. Zakres odniesienia. Test immunologiczny quimiluminescente. U zdrowych ochotników. Wartość predykcyjna.,
Beta 2-mikroglobulina (b2M) białko występujące we wszystkich komórkach zarodkowych, jest związane z antygenami klasy 1 zgodności histologicznej na błonach powierzchniowych komórek (szczególnie obficie występującymi na limfocytach i monocytach).1 został po raz pierwszy odkryty w moczu pacjentów z niewydolnością nerek.2 ze względu na swoją niską masę cząsteczkową (11 800 Daltonów), 95% wszystkich wolnych b2M w osoczu jest eliminowane przez filtrację kłębuszkową, a 99,9% z nich jest odbierane przez proksymalne komórki kanalikowe. W przypadku prawidłowego współczynnika filtracji nerkowej podwyższone stężenie b2M w surowicy (Sb2M) wskazuje na duże wytwarzanie lub uwalnianie b2m3., Po aktywacji układu odpornościowego limfocyty B I T aktywnie uwalniają b2M do krążenia, skąd jest później eliminowany poprzez filtrację kłębuszkową i reabsorpcję kanalikową.Zwiększenie stężenia Sb2M stwierdzono u pacjentów z dyskrazjami komórek krwi, w tym szpiczakiem mnogim, 5, 6 złośliwych zaburzeń limfoproliferacyjnych, 7 zaburzeń mieloproliferacyjnych, 8 niektórych zakażeń wirusowych, takich jak zakażenie HIV 9, wirusami cytomegalii, zapaleniem wątroby typu non-A i non-B oraz mononukleozą zakaźną.,Poziom Sb2M jest również stosowany jako ważny czynnik prognostyczny u pacjentów z zakażeniami szpiku mnogiego 5,6 i HIV.9
normalny zakres odniesienia dla sb2m u zdrowych osobników znaleziony w literaturze został określony przy użyciu populacji północnoamerykańskich i europejskich (test DPC Immulite®). W próbie określenia normalnego zakresu poziomów sb2m wśród bezobjawowych seronegatywnych osobników afrykańskich, Piwowar et al. (1995)10 stwierdzono, że 50% tych pacjentów miało nieprawidłowe wartości (średnie wartości 2,35 mg/mL). W innym badaniu średnia wartość Sb2M u zdrowych ochotników wynosiła 1,36 mg / mL.,11 w niniejszym raporcie opisujemy wartości Sb2M u zdrowych brazylijskich pacjentów z grupy dawców krwi w centrum Hematologii i Hemoterapii w Santa Catarina (HEMOSC).
W badaniu brali udział dawcy krwi, mężczyźni i kobiety w wieku od 25 do 50 lat. Wszystkie osoby zostały poddane ocenie klinicznej przeprowadzonej przez HEMOSC, w tym kwestionariuszom i przesiewowym testom laboratoryjnym zgodnie z brazylijskimi kryteriami prawnymi. Wszyscy ochotnicy spełniający te kryteria wyrazili ustną i pisemną zgodę na pobranie dodatkowych 5 mL krwi do celów badania., Protokół eksperymentalny został zatwierdzony przez Komisję Etyczną Szpitala Uniwersyteckiego we Florianópolis, Federalnego Uniwersytetu Santa Catarina.
metody
krew pełną pobierano za pomocą systemu Vacutainer w 10-mL suchych probówkach, a surowicę oddzielano przez odwirowanie. W celu wyeliminowania składników lipidowych próbki surowicy poddano ultracentryfugacji w dawce 18000 g przez 20 min. Wszystkie próbki krwi zostały pobrane między 14: 00 a 18: 00 i zostały przetworzone w ciągu 5 godzin po wykonaniu wkłucia dożylnego., Próbki wstępnie rozcieńczono 1 do 41 w rozcieńczalniku próbki B2M (IMMULITE® Beta-2 Microglobulin kit, DPC, USA) zgodnie z instrukcjami producenta, a do przeprowadzenia testu wymagane było 5 mL. Sb2M mierzono za pomocą chemiluminescencyjnego enzymatycznego testu immunologicznego fazy stałej z wykorzystaniem zautomatyzowanego analizatora IMMULITE® (DPC, Los Angeles, USA).
analiza statystyczna
w badaniu zakresu odniesienia dla testu DPC IMMULITE® Średnia wartość wynosiła 1, 26 mg / mL., National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) zajmuje się zastosowaniem kryteriów wykluczenia a priori i a posteriori w celu uzyskania zdrowych próbek.W związku z tym, wszyscy pacjenci z wartościami Sb2M większymi niż 2, 0 mg/mL zostali poddani ponownej ocenie klinicznej w celu uzyskania akceptacji wartości, aby upewnić się, że każda osoba była „zdrowa”. Dane zostały wprowadzone i przeanalizowane za pomocą oprogramowania Microsoft Excel. Obliczono wartości średniej i odchylenia standardowego. Zakresy referencyjne 95. percentyla określono za pomocą 2,5 i 97,5 percentyla., Zgodnie z procedurą zalecaną przez NCCLS, obserwacje zostały uszeregowane według wielkości, a percentyle 2,5 i 97,5 uzyskano odpowiednio jako uporządkowane obserwacje 0,025 (n + 1) i 0,975 (n + 1) (N= wielkość próby). Jeśli szacowane wartości Rang nie były liczbami całkowitymi, przeprowadzono interpolację liniową.12
wyniki
w badaniu wzięło udział dziewięćdziesięciu sześciu brazylijskich dawców krwi, 60 mężczyzn i 36 kobiet, ze średnim wiekiem (yr) wynoszącym 33 lata. Wartości Sb2M wahały się od 1,05 do 3,9 mg / mL, Jak pokazano na rysunku 1, a średnia wynosiła 2,46 mg / mL (odchylenie standardowe = 0,73)., Dlatego, stosując 97,5 percentyla zgodnie z rutynową metodą nieparametryczną, 12 3,9 mg/mL uznano za górną granicę normy. Ustalony zakres wynosił 1,3-3,9 mg/mL.
dyskusja
naukowcy na całym świecie donoszą o przydatności Sb2M jako wiarygodnego producenta w ocenie postępu zakażenia HIV i szpiczaka mnogiego.5-8,10,13 u osób zakażonych HIV Sb2M wydaje się być lepszym prognostykiem stanu zakażenia HIV niż liczby CD4, a także lepszym prognostykiem przeżycia, ze zwiększonym poziomem Sb2M związanym z progresją choroby.,10
u pacjentów ze szpiczakiem mnogim donoszono o zwiększonej produkcji i w konsekwencji uwalnianiu Sb2M do płynów ustrojowych. Znaczenie tych danych dla klinicystów wynika z faktu, że komórki plazmatyczne szpiczaka wytwarzają Sb2M. dlatego też przyjmuje się, że wartości Sb2M mogą wskazywać nie tylko na wielkość, ale także aktywność proliferacyjną komórek szpiczakowych13 i mogą być uznane za niespecyficzny czynnik powodujący masę guza.5,6,13,14 ponadto prognostyczna rola Sb2M w innych zaburzeniach proliferacyjnych została potwierdzona przez wielu autorów,7, 14,15.,Z drugiej strony donoszono, że u pacjentów z niskim współczynnikiem przesączania kłębuszkowego zwiększono stężenie Sb2M, a wyniki badań laboratoryjnych należy interpretować ostrożnie.6,7,13
odstępy referencyjne są stosowane klinicznie, wraz z dodatkowymi informacjami, jako wytyczne dotyczące stanu pacjenta. Określone przez producenta badanie zakresu referencyjnego dla produktu IMMULITE® sb2m (1,0-1,7 mg/mL, średnia 1,26 mg/mL) oznaczono przy użyciu próbek surowicy od prawie 800 dorosłych ochotników, w tym zarówno mężczyzn, jak i kobiet w wieku od 20 do 70 lat., Tematy zostały wybrane na podstawie kwestionariuszy. Próbki pobrano we Francji, Niemczech, Holandii i Portugalii, a uzyskane wartości analizowano nieparametrycznie. Sugerowana górna granica wynosiła 1,7 mg / mL. Wartości te mogą nie być reprezentatywne dla osób z Brazylii. W przypadku braku odpowiednich limitów zakresu odniesienia dla Sb2M pochodzących od jakiejkolwiek populacji brazylijskiej, wielu badaczy wykorzystało dane uzyskane od osób z Ameryki Północnej i Europy, które przedstawiały górne limity 2,3 razy niższe niż te uzyskane w niniejszym badaniu.,
NCCLS zaleca stosowanie nieparametrycznych przedziałów referencyjnych i aby wielkość próby, n, składała się z co najmniej 120 wartości, aby obliczyć 95% przedział odniesienia, 2,5% i 97,5% punktów rozkładu 12. Liczba ta jest minimalną liczbą wartości potrzebną do zbudowania przedziałów ufności zawierających informacje o dokładności obliczonych granic odniesienia.
w tym badaniu oceniono 96 próbek., Naszym celem nie było tworzenie nowych interwałów referencyjnych, ale zwrócenie większej uwagi na potrzebę, aby każde laboratorium produkowało własne interwały referencyjne dla wszystkich parametrów, pomimo wielu trudności, w tym praktycznych i wysokich kosztów.
niniejsze badanie wskazuje, że w różnych populacjach mogą występować znacznie różne zakresy wartości Sb2M, co sugeruje, że każde brazylijskie laboratorium powinno ustalić własne granice referencyjne.,
podziękowania
dziękujemy Centrum Hematologii i Hemoterapii w Santa Catarina oraz laboratorium analizy klinicznej, Szpital Uniwersytecki w Florianópolis za próbki i pomoc techniczną. Jesteśmy wdzięczni firmie DPC IMMULITE® za nieodpłatne dostarczenie zestawu odczynników do tego badania oraz dr Joanicie Del Moral z oddziału Hematologii Szpitala Uniwersyteckiego we Florianópolis.
2. Berggard I & Bearn AG. Izolacja i właściwości beta-2-globuliny o niskiej masie cząsteczkowej występującej w płynach biologicznych człowieka., J Biol Chem 1968;243(15): 4095-103.
6. Greipp PR, Katzman JA, O ' Fallon WM, Kyle RA. Wartość poziomu beta 2-mikroglobuliny i wskaźników znakowania komórek osocza jako czynników prognostycznych u pacjentów z nowo rozpoznanym szpiczakiem. Blood 1988;72(1):219-23.
7. Constantines IP, Pathouli C, Karvountzis G, Papadopoulos P, Varvoutsi-Constantinides M, Eliakis P, et al. W surowicy beta 2 mikroglobulina w złośliwych schorzeniach limfoproliferacyjnych. Rak 1985;15(10): 2384-89.
8. Rodriguez J, Cortes J, Talpaz M, O ' Brien S, Smith TL, Rios MB, et al., Stężenie beta-2 mikroglobuliny w surowicy jest istotnym czynnikiem prognostycznym w przewlekłej białaczce szpikowej. Clin Cancer Res 2000; 6:147-52.
10. Cooper E, Forbes m & Hambling M. surowica beta 2-mikroglobulina i stężenie białka C-reaktywnego w zakażeniach wirusowych. J Clin Pathol 1985; 37:1140-3.
11. Diamondstone LS, Tollerud DJ, Fuchs D, Wachter H, Brown LM, Maloney E, et al. Czynniki wpływające na stężenie neopteryny i beta 2-mikroglobuliny w surowicy w zdrowej, zróżnicowanej populacji. J Clin Immunol 1994;14 (6): 368-74.
12., National Committee for Clinical Laboratory Standards. How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory: approved guideline, NCCLS document C28-A and C28-A2, Villanova, PA, 1995, 2001, NCCLS.