Studere fag
kvinnene ble rekruttert fra en fabrikk i den urbane fellesskap av Cuernavaca, 89 km sør for Mexico By., Hemoglobin-konsentrasjon i alt kvinner i fabrikken ble bestemt fra finger-stikk blodprøver, etterfulgt av en venøs blodprøve for å finne ut serum ferritin blant ikke-blodfattig kvinner. Av en total av 20 ikke-blodfattig kvinner med lavt jern butikker ble rekruttert basert på hemoglobin konsentrasjon ⩾125 g/l og serum ferritin konsentrasjon <25 µg/l. Eksklusjonskriterier inkludert graviditet og amming, fordøyelsessystemet eller metabolske forstyrrelser (inflammatorisk tarmsykdom (crohns sykdom, kronisk diaré, cystisk fibrose), andre kroniske sykdommer og de som tar jerntilskudd., I alt 20 tilsynelatende friske barn (i alderen 6-24 måneder) og 20 tilsynelatende friske barn (i alderen 2-5 år) ble rekruttert fra mødre med tilstrekkelig hemoglobinnivåer. Fag og barnas foreldre var fullt informert om studien har som mål og prosedyrer, og skriftlig samtykke ble innhentet. Den Etiske Komiteen på Instituto Nacional de Salud Pública, Cuernavaca, Mexico og Swiss Federal Institute of Technology, Zürich, Sveits gjennomgått og godkjent protokoll.,
Sample size
Eksempel størrelse beregningene var basert på interindividual og intraindividual variasjoner i jern absorpsjon, som observert i tidligere studier av jern biotilgjengelighet hos spedbarn og små barn (Davidsson et al., 1994, 1997, 2000, 2004). Det ble anslått at 20 barn ville være et minimum eksempel størrelse til å oppdage en 50% signifikant forskjell i loggen mener jern absorpsjon fra et aritmetisk gjennomsnitt baseline jern absorpsjon av 7%, med 90% kraft, en betydning nivå på 0,05 (gruppert t-test) og en type i feil sats på 5%., I påvente av en frafallsprosenten på 10%, disse estimatene er angitt at minst 20 fag i hver gruppe ville være nødvendig for å fullføre studiene.
– Studie design
Kvinner, spedbarn og barn ble randomisert til å motta test måltid enten med jernholdig sulfat eller med jernholdige fumarate på påfølgende dager. Testen måltid ble administrert som frokost etter en natts faste. Aksept av testen måltid ble bekreftet med hver spedbarn og barn før innmelding i studien. Ingen mat eller drikke var tillatt for 3 timer etter at du har fullført inntak av merket måltid., Spedbarn, barn og forble under tett oppfølging under og etter testen måltid inntak.
I alt 5 ml av venøse blodet ble trukket inn EDTA-behandlet rør like før inntak av den første testen måltid og igjen 14 dager senere. Blodprøver ble analysert for jern status indikatorer (hemoglobin og serum ferritin) og jern isotopisk sammensetning. Kroppen vekt og høyde ble målt ved hver blod prøvetaking punkt.
Test måltid
testen måltid var en søtet mais-melk å drikke basert på lokale Meksikanske mais mel grøt drink ‘atole’. Det var laget fra degermed mais mel (24.,7%), hel-melk pulver (11.7%), ‘piloncillo’ (et solid form av uraffinert brunt sukker; 63.5%) og renset vann (200 ml), uten tilsatt jern eller ascorbic acid. Standardisert test måltider ble utarbeidet spesielt for studier av lokalt tilgjengelig mat som er kjøpt i bulk, med unntak for degermed mais mel som var utilgjengelig i Mexico og var hentet fra Sveits (Mill Sveitsiske Zürich, Sveits). Degermed mais mel ble brukt for å minimere phytic acid innhold av mel, som ellers ville redusere biotilgjengeligheten av jern fra teste måltid (Hurrell et al., 2002)., Testen måltidet ble tilberedt i en kjøkken-anlegget og transporteres varme til fôring center på fabrikken, hvor en porsjon 220 g per kvinne og 60 g per spedbarn og barn ble utarbeidet som en frokost og ble etterfulgt av inntak av vann. Alle test måltider var identiske bortsett fra tillegg på enten 4 mg Fe (kvinner) eller 2,5 mg Fe (spedbarn og barn) som enten -jernholdige fumarate eller -jernholdig sulfat, som ble lagt til test måltid rett før servering. Jernholdige fumarate pulver ble lagt direkte inn i testen måltid og jernholdig sulfat ble lagt til som en løsning.,
Stabil isotop etiketter
Isotopically merket-jernholdige fumarate ble produsert av Dr Paul Lohmann GmbH (Emmerthal, Tyskland) fra beriket av grunnstoffet jern ved hjelp av en nedskalert prosedyre for tilsvarende kommersielle produksjonsprosessen. Den samme prosedyren har blitt brukt i tidligere studier (Davidsson et al., 2000, 2001, 2002; Fidler et al., 2003; Sarker et al., 2004). Enkelte jernholdige fumarate doser ble pre-veide inn polyetylen rør, der det eksakte beløpet legges var bestemt av røret ned i vekt, og så ble lagret., -jernholdig sulfat ble utarbeidet fra isotopically beriket av grunnstoffet jern (Chemgas, Boulogne, Frankrike), som ble oppløst i 0.1 mol H2SO4/l og gjort opp til riktig konsentrasjon. Løsningen ble holdt under argon atmosfære i en polyetylen flaske til nødvendig og veide inn individuelle doser før fôring.,
isotopisk sammensetning av både etiketter ble målt i eksemplarer av negative termisk ionisering mass spectrometry ved hjelp av et magnetisk sektor feltet mass spectrometer (MAT262; Finnigan MAT, Bremen, Tyskland) utstyrt med en multi-samleren system av Faraday kopper for ion-gjenkjenning. Jern konsentrasjon av hver etikett ble målt i eksemplarer av inverse isotopisk fortynning analyse (Walczyk, 1997). Jernholdige fumarate ble oppløst i konsentrert salpetersyre før isotopisk fortynning., Jern standard av naturlige isotopisk sammensetning var forberedt gravimetrically fra en isotopisk referansemateriale (IRMM-014; E. U. Institutt for Referanse Materialer og Målinger, Geel, Belgia). Isotopisk forholdstall ble målt ved negative termisk ionisering mass spectrometry (Walczyk, 1997).
Isotopisk sammensetning av blodprøver
Beriket hele blodprøver ble mineralisert med mikrobølgeovn fordøyelsen ved å bruke en blanding av konsentrert HNO3 og H2O2 (30%) som oksiderende agenter., Strykejern ble skilt ut fra matrisen med anion exchange-kromatografi og en væske–væske ekstraksjon trinn i diethyl ether (Walczyk et al., 1997). Kjemiske feltene ble behandlet gjennom hele prosedyren. Isotopisk sammensetning av skilt strykejern ble målt ved negative termisk ionisering mass spectrometry.
Strykejern status
Nylig trukket hele blodprøver ble alikvotert for måling av hemoglobin-konsentrasjon ved hjelp av en bærbar HemoCue fotometer (Hemocue Inc., Angelholm, Sverige) og standardiserte teknikker., Tilsvarende kvalitetskontroll materialet ble analysert ved begynnelsen av hver prøvetaking dag (Hemocue Inc., Angelholm, Sverige). En alikvot av fullblod ble separert i serum ferritin målinger av automatiserte immunoassay (Immulite En; DPC, Los Angeles, CA, USA) ved ETH, Zürich, og de resterende fullblod ble frosset for senere analyse av isotopisk sammensetning.,
Beregning av jern absorpsjon
mengden av 57Fe og 58Fe isotopisk etiketter i blodet, 14 dager etter administrering, ble beregnet basert på skift av Fe isotopisk forhold, og den estimerte mengden av sirkulerende jern i kroppen. Beregningene var basert på prinsipper av isotopisk fortynning, tatt i betraktning at strykejern isotopisk etiketter ikke var mono-isotopisk. Sirkulerende jern ble beregnet basert på blod volum og hemoglobin konsentrasjon. Blod volum beregningene var basert på kroppsvekt og høyde i henhold til Brown et al. (1962) for kvinner og Linderkamp et al., (1977) for barn. For beregninger av brøkdeler av jern absorpsjon, 80% inkorporering av absorbert jern i erytrocytter ble antatt for kvinner (Hosein et al., 1967) og 90% for barn (9). Den RBV av jernholdige fumarate ble beregnet for hvert sett med data.
Statistiske analyser
Brøkdeler av jern absorpsjon verdiene er presentert som geometrisk middel og s.d. Alle statistiske tester ble drevet på 80% og utført med 95% konfidensintervall på log-transformerte data, som jern absorpsjon verdier er ikke normalfordelt., Studentens paret t-test ble brukt til å sammenligne data i hver aldersgruppe. Den RBV av jernholdige fumarate mellom aldersgrupper ble sammenlignet ved hjelp av Student er gruppert t-test. Statistisk power-analyse ble utført ved hjelp av kommersiell programvare (StatMate 2; GraphPad Software Inc. San Diego, CA, USA). Lineær regresjon ble brukt for å vurdere forholdet mellom jern absorpsjon og strykejern butikker (representert ved serum ferritin) og pearsons korrelasjon ble brukt til å undersøke forholdet mellom serum ferritin og RBV.