Ethik
Diese Studie wurde gemäß den Vorschriften der Helsinki-Erklärung (1964) durchgeführt und entspricht der regionalen Ethikkommission in Göteborg.
Hunde
Es wurden zwei Hunde benutzt, Hanna, eine 10-jährige Black Giant Schnauzer (Chip Nr., 967000000389928), und Lotti, ein 6-jähriger schwarzer Riese Schnauzer (Chip no. 098100311386). Der Besitzer und Handler ist GH. Die Hunde leben als Haustiere mit dem Besitzer und seiner Familie. Es gibt den ganzen Tag freien Zugang zu frischem Wasser und dreimal täglich Fütterung. Die Hunde verbringen jeden Tag mehrere Stunden im Garten oder auf Spaziergängen. Gesundheitschecks werden in der Tierklinik Värmdö in Gustavsberg durchgeführt.
Training
Die Trainingsmethode wurde an anderer Stelle ausführlich beschrieben . Für 2 Jahre vor der vorliegenden Studie wurde nur einmal wöchentlich Wartungstraining verwendet., Jede der Trainingseinheiten umfasste 4-10 Boxen, von denen 0-3 Krebsgewebe oder Blut von Patienten mit Eierstockkarzinom enthielten. Das Setup wurde vor jeder Sitzung zufällig ausgewählt. Dieses Programm ermöglichte es den Hunden, bei jeder Trainingsveranstaltung mit einem anderen Problem konfrontiert zu werden. Die Hunde wurden nur für eine korrekte Identifizierung belohnt. Für das Training wurden Blutproben mit >500 U/ml CA-125-Werten als Indikator für Eierstockkarzinome verwendet. Ein Tropfen der Trainingsprobe wurde in eine kleine Plastikschale in jeder Schachtel gegeben., Die während der Trainingszeit verwendeten Blutproben wurden in den Tests nicht verwendet. Die Hunde wurden in das experiment mit der Genehmigung von der Regionalen Ethikkommission in Göteborg, Lizenz-Nummer: S-220-08. Die Hunde hatten während der Trainings-und Teststunden freien Zugang zu frischem Wasser. Nach 2 Stunden Arbeit wurden die Hunde gelaufen oder hatten 20 Minuten Freizeit.
Patientenauswahl
Patienten wurden aus den Datenbanken der Klinik und der Biobank für die Aufnahme in diese retrospektive Studie ausgewählt. Letzteres enthält Blut und Krebsgewebe von Patienten mit Eierstockkrebs., Das Material wurde nach Genehmigung des einzelnen Patienten gesammelt und durch das Behandlungsprogramm für Eierstockkrebs in Westschweden geregelt. Die Patientenauswahl wurde zuerst aus der Klinikdatenbank getroffen, dann wurden die Ergebnisse mit der Bio-Bank-Datenbank korreliert, um Blutproben zu erhalten.
Das Hauptauswahlkriterium für alle Studienpatienten war die klinische vollständige Remission (CR) vor dem sechsten (endgültigen) geplanten Chemotherapiekurs. Patienten, die für die Serie I ausgewählt wurden, wurden in 3 Gruppen eingeteilt., Gruppe A umfasste Patienten mit 3 Jahren rückfallfreiem Überleben, Gruppe B Patienten, die innerhalb von 6 Monaten nach der letzten Behandlungssitzung einen Rückfall erlitten hatten; und für Gruppe C Patienten, die zwischen 1 und 2 Jahren nach der Behandlung einen Rückfall erlitten hatten. Insgesamt 66 Patienten mit CR, die in den Jahren 2001-2007 ausgewählt wurden, die in der Serie 1. Alle stammten aus dem Raum Göteborg und befanden sich ebenfalls in der Datenbank der Bio-Bank. Zweiundvierzig Patienten hatten Proben in einer Biobank, die einem der drei sekundären Auswahlkriterien für die Aufnahme in Gruppe A, B oder C entsprachen., Die Auswahl für die Serie II erfolgte nur über die Biobank-Datenbank.
Blutproben
Blutproben wurden von Patienten im westschwedischen Göteborg entnommen. Die Bevölkerung beträgt etwa 600.000. Das Behandlungsprogramm für Eierstockkrebs in erfordert CA-125-Analyse bei zwei Gelegenheiten. Erstens vor oder direkt nach der Primäroperation und zweitens vor der sechsten Chemotherapie. Wie im Behandlungsprogramm für Eierstockkarzinome üblich, wurde der CA-125-Spiegel jedoch nicht in die Nachsorge einbezogen, obwohl Ärzte die Möglichkeit haben, ihn zu überprüfen., Blutproben mit >500 U/ml CA-125-Werten wurden für das Hundetraining verwendet, wobei ein Tropfen in eine kleine Plastikschale in jeder Box gegeben wurde. Blutproben, die während des Trainings verwendet wurden, wurden in den Tests nicht verwendet.
Referenzblutproben
Material für die Referenzgruppe wurde aus der Bio-Bank-Datenbank ausgewählt. Klinisch-pathologischen Variablen wurden nicht betrachtet, da unsere früheren Studien zeigten die Ergebnisse, dass Sie nicht auf die Hunde‘ Empfindlichkeit der Erkennung ., Insgesamt 62 Proben (42 für Serie I und 20 für Serie II) von verschiedenen Personen mit CA-125-Werten >200 U/ml wurden in Serie I und II zufällig als Referenzmaterial ausgewählt.
Testblutproben in Serie I
Zweiundvierzig Proben wurden gesammelt und als Testmaterial in Serie I verwendet. Die Patienten wurden in drei Gruppen eingeteilt., Gruppe A bestand aus 13 Patienten mit CR, 3-jährigem rezidivfreiem Überleben und normalen (<35 U/ml) CA-125werten vor ihrem letzten Behandlungsverlauf. Gruppe B bestand aus 12 Patienten mit CR, die innerhalb von 6 Monaten einen Rückfall erlitten hatten, und alle außer 2 (61 U/ml; <200 U/ml) hatten CA-125 <35UI. Gruppe C bestand aus 17 Patienten mit CR, Rezidiv zwischen 1 und 2 Jahren und normalen CA-125-Werten. Tumorhistopathologie, Stadium und Grad variierten innerhalb der Gruppen.,
Für das Training wurden Blutproben mit >500 U / ml CA-125-Werten verwendet, wobei ein Tropfen in eine kleine Plastikschale in jeder Box gegeben wurde. Blutproben, die während des Trainings verwendet wurden, wurden in den Tests nicht verwendet.
Testblutproben in Serie II
Proben wurden 3 und 6 Monate nach dem sechsten, abschließenden Chemotherapiekurs entnommen. Leider konnten wir Patienten in Serie I, Gruppe A, nicht folgen, da keiner von ihnen Blut in der Blutbank hatte. Wir sammelten Blut von 10 anderen Patienten, die regelmäßig verfolgt wurden., Das mittlere Spenderalter betrug 65 Jahre (Bereich 38-78 Jahre).
Kontrollblutproben
Kontrollproben wurden in den 2-Jahren zwischen 2007 und 2009 gesammelt, hauptsächlich von weiblichen Freiwilligen des medizinischen Personals in Göteborg. Einschlusskriterien waren, dass sich die Patienten gesund fühlten, nicht schwanger waren und frei von gynäkologischen Erkrankungen waren. Kontroll-und Testmaterialien waren nicht altersgerecht. Jüngere Personen wurden bewusst als Quelle für Kontrollproben ausgewählt, um das Risiko eines asymptomatischen Ovarialkarzinoms zu verringern., So hatten sowohl die Kontroll-als auch die Testgruppen Proben von Frauen vor und nach der Menopause.
Probenvorbereitung
Blutproben wurden in EDTA-Röhrchen gesammelt und dann bei 3000 U / min für 10 min mit Plasmatöpfen über die kleinen Kunststoffröhrchen zentrifugiert. Nach der Zentrifugation wurde das Plasma in zwei Teile geteilt, einen für die CA-125-Analyse und den anderen für nachfolgende Experimente. Letzterer Teil wurde bei -80°C in der Tumorbank aufbewahrt (Lizenznummer des Ethikkomitees: S-220-08, Regional Ethical Review Board in Göteborg)., Kontrollplasmaproben wurden identisch zu den Targets verarbeitet und gelagert. Röhrchen mit Kontrollblut wurden jedoch separat gelagert. Das mittlere Spenderalter betrug 45 Jahre (Bereich 29-65 Jahre).
Testdesign
Tests wurden wie zuvor beschrieben doppelblind durchgeführt . Zusammenfassend wurden sowohl Testleiter als auch Handler von der Position der Zielproben geblendet und waren nur dann am Testort anwesend, wenn die Hunde arbeiteten. Die Hunde wurden in zwei Serien getestet. Serie I umfasste 4 Tage (2 Tage pro Anlass), während Serie II 2 Tage umfasste., Zehn Läufe wurden an jedem Tag durchgeführt, mit Ausnahme eines Tages in Serie I, als 11 Läufe durchgeführt wurden. Jeder Lauf umfasste sieben Kisten, die in einem Kreis von etwa 2 m voneinander angeordnet waren. Jede Schachtel enthielt einen Tropfen Plasma; Fünf enthielten Kontrollmaterialien, eines enthielt eine Testprobe und eines enthielt eine Referenzprobe. Referenzmaterialien wurden vor oder kurz nach der Primäroperation entnommen und wiesen somit eine hohe Konzentration an Geruchsmolekülen auf. Die Platzierung der Ziel – und Referenzfelder wurde von einem Assistenten zwischen jedem Lauf geändert. Jede Box wurde zwischen den Läufen mit Alkohol gereinigt., Die Tests wurden vom Testleiter und einem Assistenten auf Papier und DVD dokumentiert .
Hundeantworten
Eine positive Antwort wurde definiert als Angabe der Zielbox durch Kratzen mit dem Vorderbein, Hinlegen und Schnüffeln (und nicht Angabe der Kontrollproben). Eine negative Antwort wurde definiert als Schnüffeln und Anzeigen eines Kontrollfelds und nicht als Anzeigen des Ziels. Eine unsichere Antwort wurde definiert als Anhalten an der Box, Riechen, Kratzen und möglicherweise bellen, aber geradeaus gehen und nicht liegen.,
Behandlung von Eierstockkarzinomen
Im Einklang mit dem Standardbehandlungsprogramm in Westschweden wurden die Patienten durch totale Hysterektomie, bilaterale Salpingo-Oophorektomie, Omentektomie, multiple Peritonealbiopsien und Peritonealwaschungen mit Zytologie behandelt. Ungefähr 4 Wochen nach der primären Operation wurde die erste Carboplatin -, Cyclophosphamid-und Epirubicin-Kombination verabreicht. Insgesamt wurden sechs Kurse im Abstand von 4 Wochen verabreicht.,
Statistische Methoden
Die Rohdaten wurden als Sensitivität (die bedingte Wahrscheinlichkeit des Hundes, der Krebs anzeigt, wenn die Bedingung vorhanden war) und Testspezifität (die bedingte Wahrscheinlichkeit, dass der Hund eine Probe von einem gesunden Spender ignoriert) zusammengefasst. Sensibilität und Spezifität geben Einblick in die allgemeine Klassifizierungsfähigkeit der Hunde.
Die positive und negative prädiktive Wahrscheinlichkeit, dass der Test die richtige Diagnose ergeben würde, wurde ebenfalls berechnet. Punktschätzungen wurden mit 95% Konfidenzintervallen berechnet ., Sowohl Sensitivität als auch Spezifität wurden als Proportionen ausgedrückt, so dass Standardtechniken für Proportionen für statistische Inferenz angewendet werden konnten. Konfidenzintervalle basierten auf der normalen Näherung, p ± 1,96 p 1-p / n wobei p die geschätzte Empfindlichkeit, die jeweilige Spezifität und n die Anzahl der Testläufe ist.