eredeti kutatás
szérum B2-mikroglobulin értékek az egészséges brazilok között, DPC IMMULITE® assay
B2-microglobulin em brasileiros saudáveis értékei DPC IMMULITE®
Fabíola Branco filippin; liliete Canes Souza
Department of Clinical analysis, science and Health Center, Federal University of Santa Catarina – Florianópolis/SC, Brazília. E-mail: [email protected].,br
absztrakt
cél: a jelen vizsgálat célja az volt, hogy meghatározza a normál tartományban szérum béta 2-microglobulin (sb2m) szintek között egészséges önkéntesek Brazíliában. A humán immundeficiencia vírussal (HIV) fertőzött betegeknél az Sb2M szintje emelkedett, és kimutatták, hogy a HIV-fertőzés állapotának és néhány rosszindulatú rendellenességnek, különösen a myeloma multiplexnek a legjobb előrejelzője., A brazil klinikai diagnózisban történő optimális alkalmazása érdekében megfelelő referencia-intervallumvizsgálatot végeztünk az SB2M IMMULITE® tesztre, azon a tényen alapulva, hogy referenciatartomány-határértékeit az Európai populációk között értékelték.
módszerek: kilencvenhat egészséges véradót vizsgáltak, az SB2M szintet pedig kemilumineszcens enzim immunvizsgálattal mérték az IMMULITE® automatizált analizátor segítségével.
eredmények: az sb2m értékek normál tartománya, amelyet nemparametrikus statisztikai módszerrel állapítottak meg, 1, 05-3, 9 mg/mL volt, a felső határ magasabb, mint a máshol jelentett érték.,
KÖVETKEZTETÉSEK: Ez a tanulmány bemutatta új adat azt jelzi, hogy van egy jelentős különbség a között, hogy a jelenlegi vonatkoztatási határértékek Sb2M IMMULITE® vizsgálat, valamint azokat meg Brazíliában, amely bizonyíték arra, hogy jelentős különbségek körű normális értékek előfordulhatnak különböző populációk között, valamint, hogy ezek az új értékek figyelembe kell venni a Brazil egyének.
kulcsszavak: b2-mikroglobulin. Referencia intervallum. Kemilumineszcens immunvizsgálat. Egészséges önkéntesek. Prognosztikai érték.,
absztrakt
célkitűzés: a vizsgálat célja a szérum B2-mikroglobulin (sb2m) kiindulási értékeinek meghatározása volt egészséges önkéntesekben. Ismeretes, hogy ez a paraméter magas a humán immundeficiencia vírussal (HIV) fertőzött betegeknél, és kimutatták, hogy a HIV-fertőzés és a rosszindulatú betegségek, különösen a myeloma multiplex jobb markere., Annak érdekében, hogy a legjobb klinikai diagnózis, megfelelő referencia tartomány Sb2m a brazil lakosság határoztuk meg az IMMULITE® assay; mivel ez a paraméter egy referenciatartományban meghatározott európai populációk.
módszerek: kilencvenhat egészséges véradók értékelték sb2m értékeket mértük kemilumineszcens enzim immunoassay módszerrel IMMULITE ® automatizált analizátor.
eredmények: az sb2m értékei, amelyeket nemparametrikus statisztikai módszerrel állapítottak meg, 1,05 és 3 között voltak.,9 mg / ml, és a felső határ magasabb volt, mint amit más vizsgálatokban jelentettek.
következtetés: ez a tanulmány új értékeket mutatott be, jelezve, hogy jelentős különbség van az IMMULITE® számára rendelkezésre álló Sb2M referenciakorlátjai és a jelen tanulmányban található értékek között, bizonyítva a különböző populációk közötti fontos eltérések előfordulását, és hogy a brazilok számára új értékeket kell figyelembe venni.
Uniterms: B2-mikroglobulin. Referencia tartomány. Kemilumineszcens immunvizsgálat. Egészséges önkéntesek. Prognosztikai érték.,
béta-2-mikroglobulin (b2M) az összes nukleált sejtben található fehérje a sejtfelszíni membránokon (különösen a limfocitákon és a monocitákon) található 1.hisztokompatibilitási osztályba tartozó antigénekhez kapcsolódik.1 Először a veseelégtelenségben szenvedő betegek vizeletében fedezték fel.2 kis molekulatömege (11 800 Dalton) miatt a plazmában lévő összes szabad B2M 95% – át glomeruláris szűréssel, 99,9% – át proximális tubuláris sejtekkel távolítják el. Normál veseszűrési sebesség jelenlétében az emelkedett szérum B2M (sb2m) szintek magas B2M termelést vagy felszabadulást jeleznek3., Az immunrendszer aktiválásakor mind a B -, mind a T-limfociták aktívan felszabadítják a B2M-et a keringésbe, ahonnan később glomeruláris filtrációval és tubuláris reabszorpcióval eliminálódnak.4 Nőtt Sb2M koncentrációban találtak a betegek vérsejtek dyscrasias, beleértve a myeloma multiplex,5,6 rosszindulatú lymphoproliferatív betegségek,7 myeloproliferative zavarok,8 bizonyos vírusos fertőzések, mint például a HIV infection9, cytomegalovírus, non-A, non-B hepatitis, illetve a fertőző mononukleózis.,10 az Sb2M szintjét fontos prognosztikai tényezőként is alkalmazzák myeloma5,6 és HIV fertőzésben szenvedő betegeknél.9
a szakirodalomban található egészséges egyéneknél az sb2m normál referenciatartományát észak-amerikai és európai populációk (DPC Immulite® assay) segítségével határozták meg. Annak érdekében, hogy meghatározzuk az sb2m normál tartományát tünetmentes szeronegatív afrikai egyének között, Piwowar et al. (1995)10 megállapította, hogy ezen alanyok 50% – ánál voltak rendellenes értékek (átlagértékek 2, 35 mg/mL). Egy másik vizsgálatban az egészséges önkéntesek átlagos Sb2M értéke 1,36 mg / mL volt.,11 ebben a jelentésben leírjuk az sb2m értékeket egészséges Brazil alanyokban a véradók egy csoportjából a Santa Catarina Hematológiai és Hemoterápiás központjában (HEMOSC).
vizsgálati alanyok
véradók, férfiak és nem terhes nők, 25-50 éves kor között, szerepeltek a vizsgálatban. Minden egyénnek a HEMOSC által értékelt klinikai értékelésen esett át, beleértve a kérdőíveket és a brazil jogi kritériumok szerinti laboratóriumi vizsgálatokat. Minden önkéntes, aki teljesítette ezeket a kritériumokat, szóbeli és írásbeli beleegyezését adta ahhoz, hogy további 5 mL vért vegyen fel a vizsgálat céljára., A kísérleti protokollt a Florianópolis egyetemi kórház etikai bizottsága, a Santa Catarina Szövetségi Egyetem hagyta jóvá.
módszerek
a teljes vért 10 mL-es száraz csövekben Vacutainer rendszerrel gyűjtötték össze,a szérumot centrifugálással választottuk el. A lipidkomponensek kiküszöbölése érdekében a szérummintákat 18000 g-on 20 percig ultrakentrifikálták. Az összes vérmintát 2:00 és 6:00 között kapták, és a vénapunkciót követő 5 órán belül feldolgozták., A mintákat előzetesen 1-in-41re hígították B2M mintában (IMMULITE® Beta-2 Microglobulin kit, DPC, USA) a gyártó utasításai szerint, és 5 mL-re volt szükség a vizsgálati eljáráshoz. Az SB2M-et az IMMULITE® automatizált analizátor (DPC, Los Angeles, USA) segítségével egy szilárd fázisú, 2-es kemilumineszcens enzim immunvizsgálattal mértük.
statisztikai elemzés
a DPC IMMULITE® vizsgálat referenciatartományú vizsgálata során az átlagérték 1, 26 mg/mL volt., A klinikai laboratóriumi standardok Országos Bizottsága (NCCLS) a priori és utólagos kizárási kritériumok alkalmazásával foglalkozik az egészséges minták előállításához.12 ezért minden, 2, 0 mg/mL-nél nagyobb Sb2M-értékkel rendelkező beteget klinikailag újraértékeltek az érték elfogadására annak biztosítása érdekében, hogy minden egyén “egészséges”legyen. Az adatokat Microsoft Excel szoftverrel bevittük és elemeztük. Kiszámították az átlag-és szórásértékeket. A 95. percentilis referenciatartományokat 2,5 és 97,5 százalék alkalmazásával határoztuk meg., Az NCCLS által ajánlott eljárás szerint a megfigyeléseket méret szerint rangsorolták, a 2,5, illetve 97,5 százalékos értéket pedig 0,025 (n + 1), illetve 0,975 (n + 1) elrendelt megfigyelésként kapták (n= minta mérete). Ha a becsült rangértékek nem egészek voltak, lineáris interpolációt végeztünk.12
eredmények
kilencvenhat Brazil véradó, 60 férfi és 36 nő, akiknek átlagos életkora (Év) 33 volt, szerepeltek a vizsgálatban. Értékek Sb2M között mozgott 1.05 pedig 3.9 mg/mL, amint az Ábrán látható 1, az azt jelenti volt 2.46 mg/mL (szórás = 0.73)., Ezért a szokásos nemparametrikus módszer szerint 97,5 százalékos értéket alkalmazva 12 3,9 mg/mL-t tekintették a felső normál határértéknek. A megállapított tartomány 1,3-3,9 mg / mL volt.
DISCUSSION
a kutatók világszerte beszámoltak arról, hogy az Sb2M megbízható készítőként hasznos a HIV-fertőzés és a myeloma multiplex progressziójának értékelésében.5-8,10, 13 HIV-fertőzött alanyokban az Sb2M a HIV-fertőzés állapotának jobb előrejelzője, mint a CD4-szám, valamint a túlélés jobb előrejelzője, a megnövekedett Sb2M-szint pedig a betegség progressziójához kapcsolódik.,10
myeloma multiplexben szenvedő betegeknél fokozott termelődésről és ennek következtében az Sb2M testnedvekbe történő felszabadulásáról számoltak be. Ezeknek az adatoknak a jelentősége a klinikusok számára azon a tényen alapul, hogy a myeloma plazmasejtek sb2m-et termelnek. ezért feltételezzük, hogy az Sb2M értékek nemcsak a myeloma sejtek méretét, hanem proliferatív aktivitását is jelezhetik13 és elfogadhatók a tumor tömegének nemspecifikus készítőjeként.5,6,13,14 ezenkívül az Sb2M prognosztikai szerepét más proliferatív rendellenességekben számos szerző megerősítette,7,14, 15 a klinikai értékelés megkönnyítése.,Másrészt arról számoltak be, hogy alacsony glomeruláris filtrációs rátájú betegeknél az Sb2M szint emelkedett, és a laboratóriumi eredményeket óvatosan kell értelmezni.6,7,13
a referencia-intervallumokat klinikailag, további információkkal együtt alkalmazzák a beteg állapotára vonatkozó iránymutatásként. A gyártó által meghatározott IMMULITE® Sb2M (1,01,7 mg/mL, átlagos 1,26 mg/mL) referenciatartományú vizsgálatot közel 800 felnőtt önkéntes, köztük férfiak és nem terhes nők szérummintáinak felhasználásával határozták meg, 20-70 éves korig., Az alanyokat kérdőívek alapján választották ki. A mintákat Franciaországban, Németországban, Hollandiában és Portugáliában gyűjtötték össze, és a kapott értékeket nem parametrikusan elemezték. A javasolt felső határ 1,7 mg / mL volt. Ezek az értékek nem feltétlenül reprezentatívak a brazil egyének számára. A brazil populációból származó sb2m-re vonatkozó megfelelő referenciatartomány-határértékek hiányában sok kutató olyan észak-amerikai és európai alanyoktól származó adatokat használt fel, amelyek 2,3-szor alacsonyabbak voltak, mint a jelen vizsgálatban.,
az NCCLS nemparametrikus referenciaintervallumok alkalmazását javasolja, és hogy az n mintaméretnek legalább 120 értékből kell állnia egy 95% – os referenciaintervallum, 2,5% – os és 97,5% – os eloszláspont kiszámításához12. Ez a szám a konfidencia-intervallumok kialakításához szükséges értékek minimális száma, amely tájékoztatást nyújt a számított referenciakorlátok pontosságáról.
ebben a vizsgálatban 96 mintát vizsgáltak., A cél az volt, hogy nem termelnek új referencia időközönként, hanem az, hogy nagyobb hangsúlyt kell minden laboratóriumban előállítani saját referencia időközönként minden paraméterek annak ellenére, hogy számos nehézséget, beleértve a gyakorlati síkon, valamint a magas költségeket.
a jelen vizsgálat azt mutatja, hogy az sb2m értékek szignifikánsan eltérő tartományai fordulhatnak elő a különböző populációk között, ami arra utal, hogy minden Brazil laboratóriumnak meg kell határoznia saját referencia-határértékeit.,
elismerések
köszönjük a Santa Catarina Hematológiai és Hemoterápiás központját, valamint a Florianópolis Egyetemi Kórház klinikai analízis Laboratóriumát a mintákért és a technikai segítségnyújtásért. Hálásak vagyunk a DPC IMMULITE® – nak, hogy a reagenskészletet ingyenesen biztosítja a tanulmányhoz, valamint Dr. Joanita Del Moral-nak a Florianópolis Egyetemi Kórház hematológiai osztályától.
2. Berggard i & Bearn AG. Az emberi biológiai folyadékokban előforduló kis molekulatömegű béta-2-globulin izolálása és tulajdonságai., J Biol Chem 1968;243 (15):4095-103.
6. Greipp PR, Katzman JA, O ‘ Fallon WM, Kyle RA. Újonnan diagnosztizált myelomában szenvedő betegeknél a béta2-mikroglobulin szint és a plazma sejtcímkézési indexek értéke prognosztikai tényezőként. Vér 1988;72(1):219-23.
7. Constantines IP, Pathouli C, Karvountzis G, Papadopoulos P, Varvoutsi-Constantinides M, Eliakis P, et al. Szérum béta-2 mikroglobulin malignus lymphoproliferatív rendellenességek esetén. Rák 1985;15(10): 2384-89.
8. Rodriguez J, Cortes J, Talpaz M, O ‘ Brien S, Smith TL, Rios MB, et al., A szérum béta-2 mikroglobulin szint jelentős prognosztikai tényező Philadelphia chomossome-pozitív krónikus myeloid leukémiában. Clin Cancer Res 2000; 6: 147-52.
10. Cooper E, Forbes m & J Clin Pathol 1985;37: 1140-3.
11. Diamondstone LS, Tollerud DJ, Fuchs D, Wachter H, Brown LM, Maloney E, et al. Egészséges, változatos populációban a szérum neopterin-és béta-2-mikroglobulin-szintet befolyásoló tényezők. J Clin Immunol 1994;14 (6):368-74.
12., Nemzeti klinikai laboratóriumi Szabványügyi Bizottság. A referenciaintervallumok meghatározása és meghatározása a klinikai laboratóriumban: jóváhagyott iránymutatás, Nccls dokumentum C28-A és C28-A2, Villanova, PA, 1995, 2001, NCCLS.