vizsgálati alanyok
A nők voltak, akiket a gyár a városi közösség Cuernavaca, 89 km-re délre, Mexico City., A gyárban lévő összes nő Hemoglobin koncentrációját ujj-szúró vérmintákból határozták meg, majd vénás vérmintát követtek a szérum ferritin meghatározására a nem anémiás nők körében. Összesen 20 nem vérszegény nők alacsony vasraktárak toboroztak alapján hemoglobin koncentráció ⩾125 g/l, szérum ferritin-koncentráció <25 µg/l. Kizárási kritériumok szerepelnek terhesség, szoptatás, gyomor -, vagy anyagcsere-betegségek (gyulladásos bél-betegség, a krónikus hasmenés, a cisztikus fibrózis), egyéb krónikus betegségek, illetve azoknál, akik vaspótló., Összességében 20 látszólag egészséges (6-24 hónapos) és 20 látszólag egészséges (2-5 éves) gyermeket vettek fel megfelelő hemoglobinszintű anyákból. Az alanyokat és a gyermek szüleit teljes körűen tájékoztatták a tanulmányi célokról és eljárásokról, és írásos beleegyezést kaptak. A mexikói Instituto Nacional De Salud Pública, Cuernavaca és a svájci Zürich Szövetségi Technológiai Intézet Etikai Bizottsága felülvizsgálta és jóváhagyta a jegyzőkönyvet.,
mintaméret
a mintaméret-számításokat a vas felszívódásának egy-és egy-egy, a csecsemők és kisgyermekek vas biohasznosulását vizsgáló korábbi vizsgálatokban megfigyelt interindividuális és intraindividuális variációira alapozták (Davidsson et al., 1994, 1997, 2000, 2004). A becslések szerint 20 gyermek lenne a minimális mintaméret kimutatására 50% jelentős különbség a log átlagos vas felszívódását a számtani átlag kiindulási vas felszívódását 7%, 90% teljesítmény, a szignifikancia szint 0,05 (párosítatlan T-teszt), és egy I. típusú hiba aránya 5%., A 10% – os lemorzsolódás előrejelzésével ezek a becslések azt mutatták, hogy minden csoportban legalább 20 alanynak kell elvégeznie a vizsgálatokat.
vizsgálati terv
nőket, csecsemőket és gyermekeket véletlenszerűen jelöltek ki arra, hogy egymást követő napokon vas-szulfáttal vagy vas-fumaráttal kapják meg a vizsgálati ételt. A vizsgálati ételt egy éjszakai böjt után reggeliként adták be. A vizsgálatba való felvétel előtt minden csecsemőnél és gyermeknél megerősítették a vizsgálati étkezés elfogadhatóságát. A jelzett étkezés teljes bevitele után 3 órán át nem lehetett ételt vagy italt fogyasztani., A csecsemők és gyermekek a vizsgálati étkezés alatt és után is szoros felügyelet alatt maradtak.
összesen 5 ml vénás vért vontak be EDTA-val kezelt csövekbe közvetlenül az első vizsgálati étkezés előtt, majd 14 nappal később. Vérmintákat elemeztek a vas állapotjelzők (hemoglobin és szérum ferritin) és a vas izotóp összetételére vonatkozóan. A testtömeget és a magasságot minden vérvételi ponton mérték.
tesztliszt
a tesztliszt egy édesített kukoricatej ital volt, amely a helyi mexikói kukoricaliszt zabkása ital “atole” alapján készült. Degermed kukoricalisztből készült (24.,7%), teljes tejpor (11,7%), “piloncillo” (finomítatlan barna cukor szilárd formája; 63,5%) és tisztított víz (200 ml) hozzáadott vas vagy aszkorbinsav nélkül. A szabványosított tesztételeket különösen a helyben kapható, ömlesztve vásárolt élelmiszerekből készítették, kivéve a Mexikóban nem elérhető degermed kukoricalisztet, amelyet Svájcból (Svájci Malom, Zürich, Svájc) nyertek. A Degermed kukoricalisztet a liszt fitinsav-tartalmának minimalizálására használták fel, ami egyébként csökkentené a vas biohasznosulását a tesztlisztből (Hurrell et al., 2002)., A teszt ételt főzött a konyhában létesítménybe szállított, meleg van, hogy az etetés központ a gyárban, ahol egy adag 220 g / nő, 60 g / csecsemő, illetve gyermek volt elkészítve, mint egy reggeli, majd ezt követte a beszívott vizet. Minden vizsgálati étkezés azonos volt, kivéve a 4 mg Fe (nők) vagy a 2,5 mg Fe (csecsemők és gyermekek) hozzáadását-vas-fumarát vagy-vas-szulfát formájában, amelyeket közvetlenül a tálalás előtt adtak a vizsgálati étkezéshez. Vas-fumarát port közvetlenül a tesztlisztbe adtunk, majd vas-szulfátot adtunk oldatként.,
stabil izotópcímkék
Izotóposan jelölt-vas-fumarát a Dr Paul Lohmann GmbH (Emmerthal, Németország) dúsított elemi vasból állította elő, egyenértékű kereskedelmi gyártási eljárásuk lecsökkentett eljárásával. Ugyanezt az eljárást alkalmazták a korábbi vizsgálatok (Davidsson et al., 2000, 2001, 2002; Fidler et al., 2003; Sarker et al., 2004). Az egyes vas-fumarát dózisokat előre lemértük polietilén csövekbe, ahol a pontos hozzáadott mennyiséget a cső súlya alapján határoztuk meg, majd tároltuk., – a vas-szulfátot izotóposan dúsított elemi vasból (Chemgas, Boulogne, Franciaország) állítottuk elő, amelyet 0,1 mol H2SO4/l-ben oldottunk fel, és a megfelelő koncentrációig állítottuk elő. Az oldatot argon atmoszférában tartottuk egy polietilén palackban, amíg szükséges volt, majd az etetés előtt egyéni dózisokban lemértük.,
mindkét címke izotópos összetételét három példányban mértük negatív termikus ionizációs tömegspektrometriával mágneses szektormező tömegspektrométerrel (MAT262; Finnigan MAT, Bremen, Németország), amely Faraday csészék több gyűjtő rendszerével van felszerelve az ion detektálásához. Az egyes címkék vaskoncentrációját három példányban inverz izotópos hígítási analízissel mértük (Walczyk, 1997). A vas-fumarátot izotópos hígítás előtt koncentrált salétromsavban oldottuk., A természetes izotópos összetétel vasszabványát egy izotópos referenciaanyagból (IRMM-014; E. U. referenciaanyag-és Mérésügyi Intézet, Geel, Belgium) gravimetrikusan állítottuk elő. Az izotóp arányokat negatív termikus ionizációs tömegspektrometriával mértük (Walczyk, 1997).
a vérminták izotópos összetételét
a dúsított teljes vérmintákat mikrohullámú emésztéssel mineralizálták koncentrált HNO3 és H2O2 (30%) oxidálószerként., A vasat a mátrixból anioncserélő kromatográfiával és egy folyadék–folyadék extrakciós lépéssel dietil-éterbe (Walczyk et al., 1997). A kémiai üres anyagokat az eljárás során feldolgozták. Az elválasztott vas izotópos összetételét negatív termikus ionizációs tömegspektrometriával mértük.
vas állapota
a frissen vett teljes vérmintákat hordozható HemoCue fotométerrel (Hemocue Inc., Angelholm, Svédország) és szabványosított technikák., A megfelelő minőség-ellenőrzési anyagot minden mintavételi nap elején elemeztük (Hemocue Inc., Angelholm, Svédország). A teljes vér aliquotját automatizált immunoassay (Immulite One; DPC, Los Angeles, CA, USA) választotta el a szérum ferritin mérésekhez az ETH-ben, Zürichben, a fennmaradó teljes vért pedig fagyasztották az izotópos összetétel későbbi elemzéséhez.,
A vasabszorpció kiszámítása
a vérben lévő 57fe és 58fe izotópcímkék mennyiségét a beadás után 14 nappal a Fe izotóp arányok eltolódása és a testben keringő vas becsült mennyisége alapján számították ki. A számítások az izotópos hígítás elvein alapultak, figyelembe véve, hogy a vas izotópos címkék nem voltak monoizotóposak. A keringő vasat a vér térfogata és a hemoglobin koncentrációja alapján számították ki. A vér térfogatának számítása a testtömeg és a magasság alapján történt Brown et al szerint. (1962) a nők és Linderkamp et al., (1977) gyerekeknek. A frakcionált vas abszorpciójának kiszámításához a nők esetében az abszorbeált vas 80% – os beépülését feltételezték (Hosein et al., 1967) és 90% a gyermekek (9). A vas-fumarát RBV-jét minden adatkészletre kiszámítottuk.
statisztikai elemzés
a frakcionált vasabszorpciós értékeket geometriai eszközként és S.d. az összes statisztikai vizsgálatot 80% – os teljesítmény mellett hajtották végre, és 95% – os konfidencia intervallummal végezték a log-transzformált adatokon, mivel a vasabszorpciós értékeket általában nem osztják el., A diák páros t-tesztjét az egyes korcsoportokon belüli adatok összehasonlítására használták. A korcsoportok közötti vas-fumarát RBV-jét összehasonlították a hallgató páratlan t-tesztjével. A statisztikai teljesítményelemzést kereskedelmi szoftver (StatMate 2; GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Lineáris regressziót alkalmaztak a vas abszorpciója és a vasraktárak (a szérum ferritin által képviselt) közötti kapcsolat értékelésére, és Pearson korrelációját használták a szérum ferritin és az RBV közötti kapcsolat vizsgálatára.