Klinikai Laboratóriumi Vizsgálatok a Trichomonas vaginalis Fertőzés

DIAGNOSZTIKA

Kimutatása fertőzés lehet elérni a különböző technikákat, kezdve a klinikai diagnózis laboratóriumi-alapú tesztelés (1.Táblázat). A klinikai diagnózis megfelelő azoknál a nőknél, akiknél fertőzés tünetei jelentkeznek; kisülés, viszketés és/vagy hüvelyi szag. A leggyakrabban használt diagnosztikai teszt a nedves készítmény mikroszkópia., Egy tampont használnak a hüvelyből származó anyag összegyűjtéséreés kis mennyiségű, 0,5-1,0 ml normál sóoldatba helyezzük. A sóoldat-készítmény egy cseppjét egy csúszdára helyezzük, majd 40× objektív mikroszkóppal nézzük meg. A motilis trichomonadok megkülönböztető aszinkron mozgással láthatók a készítményben. A flagellának és a hullámzó membránnak a test egyik oldalán láthatónak kell lennie., Ügyelni kell arra, hogy az organizmusok mozgékonyak legyenek, mivel a trichomonad mérete megközelítőleg megegyezik a fehérvérsejt méretével, amely valószínűleg jelen lesz a kisülésben szenvedő betegek mintáiban. Az organizmusok a hőmérséklet-sokk miatt ex vivo mozgékonyságot veszítenek, ezért a hamis negatív eredmények elkerülése érdekében a diákat a gyűjtést követően a lehető leghamarabb el kell készíteni és olvasni. Míg a motilis trichomonadok mikroszkóposan megfigyelhetők, a vizualizációhoz elegendő organizmus elfogásához szükséges organizmusterhelés ismeretlen., Az újabb diagnosztikai vizsgálatokkal való összehasonlítás azt sugallja, hogy a nedves előkészítő mikroszkópia csak 40-60% – ban érzékeny, még a tüneti nők körében is (24). A motilis trichomonadok megfigyelése azonban nagyon specifikus, ezért nagyon hasznos a kezelés folyamatának meghatározásához. A mikroszkópiát soha nem szabad szűrési módszerként használni tünetmentes nők számára.

a mikroszkópia jobb alternatívái állnak rendelkezésre, amelyek több fertőzést észlelhetnek, és a tünetek jelenlététől függetlenül alkalmazhatók. Az egyik ilyen vizsgálat, amelyet az ápolási ponton (POC) lehet használni, az OSOM (Sekisui, Framingham, MA) immunokromatográfiás enzimvizsgálat, amelyet egy kapilláris áramlási mérőpálcán végzett, hüvelyi tampon mintával. A vizsgálat egy latex-címkével ellátott antitestre támaszkodik, amely kifejezetten a trichomonas fehérjékhez kötődik, és egy másodlagos capture antitest, amely a komplexet az oldalsó áramlású készülékhez köti., A vizsgálat a klinikai laboratóriumi javulás módosításait (CLIA) felfüggesztette, így alkalmas a POC használatra, és az eredmények 15 percen belül rendelkezésre állnak. Ennek a vizsgálatnak a teljesítményjellemzői meglehetősen jóak. Több vizsgálatban ennek a tesztnek a használata jelentősen javította az esetek megállapítását, összehasonlítva a csak mikroszkópiával talált esetek számával. Az OSOM-vizsgálatot nukleinsav-amplifikációs tesztekkel (NAATs) összehasonlító vizsgálatokban a POC-teszt meglehetősen jól teljesített, a NAATs-hoz hasonló érzékenységgel (>80% a NAATs-hoz képest >90%) (24, 25)., Ennek a tesztnek az egyetlen hátránya, hogy csak nők számára használható, és nem csatlakoztatható POC chlamydia / gonorrhoea szűréshez. Így azok a nők, akiket trichomonas-fertőzéssel kezelnek egy pozitív OSOM-teszt alapján végzett irodai látogatás során, továbbra is vissza kell térniük egy második látogatásra, ha laboratóriumi diagnosztikai teszt alapján később chlamydia vagy gonorrhoea diagnosztizálják őket.

bármely POC-teszt alkalmazása egyértelműen indokolt, ha tüneti nők vannak jelen a diagnosztikai értékeléshez., A betegség átvitelének csökkentése szempontjából kritikus fontosságú az a képesség, hogy meghatározzuk a kórokozót, és megfelelő kezelést biztosítsunk, amíg a beteg még a klinikán van (26). A mikroszkópiára támaszkodva azonban a szolgáltatóknak tisztában kell lenniük azzal, hogy a negatív eredmények hamisak lehetnek, a fertőzések legalább 50% – A hiányzik, a laboratóriumi értékelés pedig hasznos információkat nyújthat. Ez különösen fontos a jelek vagy tünetek nélküli nők esetében, valamint a férfiak (még a tünetekkel rendelkezők is) tesztelésére., A nedves készítmény mikroszkópia hasznos első teszt a tünetekkel küzdő nők számára, mivel a kezelés azonnal elvégezhető. Ezt azonban kaszkádfolyamatban kell alkalmazni, ahol mikroszkópos-negatív mintákat továbbítanak a laboratóriumba további értékelés céljából.

a laboratóriumi alapú diagnosztika hátránya, hogy nem nyújt azonnali eredményt, miközben a beteg várakozik, hogy a kezelés a beteglátogatás vége előtt biztosítható legyen., Azonban az a képesség, hogy izolálja organizmusok, hasznosítani molekuláris technológiák, teszt több kórokozók, amelyek gyakran találhatók együtt, vagy fuss nagy tétel méretben vezethet méretgazdaságosság és további orvosi információkat, amelyek támogatják a használatát ezeket a vizsgálatokat számos beállítást. Ezek az előnyök különösen fontosak a tünetek nélküli, de fertőzésveszélyes nők esetében, és általában a férfiak esetében, mivel ezekben a csoportokban a szervezet terhelése könnyebbnek tűnik, ezért nagy érzékenységre és alacsony észlelési határértékekre van szükség.,

a hagyományos laboratóriumi alapú diagnosztikai teszt Trichomonas kultúra módosított gyémánt közeggel. A tenyészeteket a tenyészközeg cseppjéből naponta legfeljebb 7 napig készített csúszda mikroszkópos vizsgálatával értékelik. A kultúrában jelentős előrelépés történt az InPouch (Biomed Diagnostics, Santa Clara, CA) rendszer rendelkezésre állásával, amely táptalajt tartalmaz egy tasakban, amelyet Mikroszkóp Színpadon lehet elhelyezni. Így a kultúra teljes mennyisége értékelhető a trichomonadok jelenlétére., Az InPouch rendszer fokozatosan növelte az érzékenységet a rutinkultúrával szemben (27), de a rendszer valódi előnye a továbbfejlesztett logisztika. Ez a rendszer olyan erőforrás-korlátozott környezetben is hasznos lehet, ahol a klinikai alapú mikroszkópia nem feltétlenül lehetséges, de egy központi laboratórium olyan alacsony technológiai igényeket is képes biztosítani, mint az inkubáció vagy a mikroszkopikus értékelés. A nagy erőforrás-beállításokban a kultúra egyetlen valódi haszna az életképes organizmusok megszerzése, amelyek relevánsak lehetnek az antimikrobiális érzékenységi vizsgálat szempontjából., A szakirodalom ismerteti a metronidazollal, a trichomonas-fertőzések leggyakrabban alkalmazott kezelésével szembeni rezisztenciáról szóló jelentéseket,de ennek a problémának a valódi mértéke ismeretlen, és az érzékenységi vizsgálatot nem rutinszerűen végzik (5).

a nem tenyészet alapú vizsgálatok gyakran növelik a fertőzések kimutatására való képességet, mivel az életképes organizmusokra már nincs szükség. A T. vaginalis első kereskedelmi forgalomban kapható nem tenyészet alapú tesztje az Affirm VPIII (BD, Sparks, MD) volt. Ez a vizsgálat DNS-szonda technológiát alkalmaz a Candida albicans, Gardnerella vaginalis és T kimutatására., vaginalis DNS egyetlen hüvelyi tamponban. A vizsgálatot csak hüvelyi ürítéssel rendelkező nők mintáival való használatra tervezték. A teszt gyors (az eredmények a <1 óra alatt érhetők el), és egy kis, tesztspecifikus műszeren futtatják. A vizsgálatot klinikai vagy helyszíni laboratóriumokban lehet elvégezni, amelyek akkreditáltak a CLIA mérsékelt komplexitású tesztelésére. A T. vaginalis kimutatására szolgáló vizsgálat teljesítménye vaginitisben szenvedő nőknél jobb, mint a mikroszkópiáé (28), de lényegesen szegényebb, mint a Naatsé., Ennek a vizsgálatnak az igazi rése a hüvelyi ürítés kórokozóinak diszentangálása olyan populációkban, ahol a STI-k (például chlamydia vagy gonorrhoea) nem elterjedtek. A magas kockázatú, tünetmentes nők körében a szűrővizsgálat alkalmazásának képtelensége, valamint a társ chlamydia / gonorrhoea tesztek hiánya ugyanazon a platformon korlátozza a teszt alkalmazhatóságát számos beállításban.

A NAATs a C. trachomatis és N. gonorrhoeae (29) szűrésének és diagnózisának elismert arany standardjává vált., Éves chlamydia szűrés ajánlott minden nő <25 éves, függetlenül a viselkedési kockázati tényezők vagy tünetek, az Egyesült Államokban, valamint számos európai országban. A gonokokkusz fertőzések szűrésére vonatkozó ajánlások a kórokozó sokkal alacsonyabb előfordulási aránya miatt az általánosított szűrés helyett specifikus viselkedési kockázati tényezőkhöz kötődnek. Mint már említettük, a trichomonas fertőzés magas kockázatú populációiban lévő nők célzott szűrése ajánlott (7)., Annak ellenére, hogy ezek a különbségek az ajánlások, különösen az Egyesült Államokban, bevett gyakorlat, hogy köteg chlamydia gonorrhoea vizsgálat a nők, akik jogosultak chlamydia szűrés. Az elmúlt 5 évben, több gyártó chlamydia / gonorrhoea NAATs termelt trichomonas NAATs, hogy lehet végezni az azonos minta (a hüvelyi tampon a minta a választás, de endocervicalis minták és a női vizelet törlődik minta típusok egyes vizsgálatok)., Ennek eredményeként az STI ellenőrző programoknak most lehetősége van szűrési és diagnosztikai szolgáltatások nyújtására, és egyidejűleg jobb epidemiológiai adatokat generálnak a T. vaginalis fertőzésével kapcsolatban különböző populációkban. Az alábbiakban leírjuk számos jelenleg rendelkezésre álló NAATs, hogy kihasználja a különböző erősítési technológiák. A fertőző betegségek diagnosztikájának gyorsan változó helyzete miatt ez a lista nem kimerítő, hanem olyan vizsgálatokra összpontosít, amelyekre jelenleg rendelkezésre állnak adatok. Továbbá itt nem találhatók konkrét teljesítményjellemzők., Ennek az az oka, hogy az érzékenységi és specificitási becslések csak olyan jók, mint azok a tesztek, amelyekhez egy új vizsgálatot hasonlítanak össze. Így a mikroszkópia nagyon érzékenynek tűnt a klinikai megfigyelésekhez képest. Most azonban tudjuk, hogy a mikroszkópia rosszul teljesít az újabb tesztekhez képest. Az inherens torzítások assay értékelés számos, és hogy az egész tanulmány összehasonlítások nehéz arra a pontra, hogy szinte értelmezhetetlen. Míg a pontos pontbecsléseknek kevés jelentése van, egyértelmű, hogy a NAATs felülmúlja a T. vaginalis összes többi vizsgálati osztályát.,

az első NAAT kimutatására T. vaginalis által jóváhagyott Food and Drug Administration (FDA) az Egyesült Államokban az Aptima TV assay (Hogic, San Diego, CA). A vizsgálat az Aptima Combo 2 Chlamydia/gonorrhoea teszt adaptációja, amely lehetővé teszi a chlamydia / gonorrhoea szűréshez gyűjtött minták felhasználását (30). A vizsgálathoz jóváhagyott mintatípusok közé tartoznak a clinician által gyűjtött vaginális tamponok, endocervicalis tamponok és endocervicalis minták a PreservCyt-ben (Hoologic, San Diego, CA), egy folyékony citológiai közegben., A technológia alapja az rRNA kivonása a példányokból, majd az elfogott rRNA transzkripciós mediált amplifikációja. Ennek a célnak a használata természetes lendületet ad a kimutatási határnak, mivel az egyes szervezetekben 102-103 példány létezik. Az izotermikus erősítésből származó erősített termékeket egy luminométerrel mért kemilumineszcens reakcióval detektáljuk. A vizsgálat elvégezhető akár a Tigris DTS rendszerrel, akár a Panther rendszerrel, mindkettő teljesen automatizált, és 275-400 eredményt képes elérni egy 8 órás munkaeltolódásban., A vizsgálat elkülönül a chlamydia / gonorrhoea tesztelésétől, így az eredeti mintát kétszer kell mintavételezni, hogy mind a három organizmusra vonatkozóan eredményeket érjünk el, de a tesztelés egyidejűleg elvégezhető a Panther rendszeren, hogy minden eredmény egyszerre elérhető legyen. Ennek a vizsgálatnak a teljesítménye kiváló, érzékenysége és specificitása >90% és >95% (30).

egy másik nagy teljesítményű, teljesen automatizált rendszer, jóváhagyott teszttel a T-hez., a vaginalis a Viper XTR rendszer, amely elvégzi a BD ProbeTec Trichomonas vaginalis Qx (TVQ) vizsgálatot (BD, Sparks, MD). Ez a vizsgálat a vas-oxiddal (31) nyert betegmintákból kivont DNS szálkiszorító erősítésén (SDA) alapul. SDA egy izoterm folyamat a valós idejű hangerősítő kimutatása a fény kibocsátását, kiváló érzékenység, specificitás (>95% >99% – kal) (31)., A Viper platform képes generálni >700 eredményeket egyetlen műszak, és tesztelheti a chlamydia / gonorrhoea és trichomonas fertőzések egyetlen döntetlen a beteg minta tartály (azaz egyetlen DNS elúciós lépés nyújthat mind a három eredmény). A beteg által kapott vaginális tamponok és endokervikális minták mellett ez a vizsgálat FDA-igényt támaszt a női vizeletre. Míg a női vizelet nem ideális Mintatípus a trichomonas (vagy chlamydia/gonorrhoea) fertőzés teszteléséhez (29), Ez egy általánosan kapott Mintatípus, így ez hasznos előny.,

míg a referencialaboratóriumokban a nagy áteresztőképességű platformok segíthetnek a költségmegtakarítások megvalósításában, lehetnek olyan szállítási és időköltségek, amelyek vonzóvá teszik a kisebb, helyi laboratóriumokban végzett vizsgálatokat. A fent említett megerősítési vizsgálat egy példa egy tesztre (CLIA mérsékelt), amelyet egy helyszíni laboratóriumban lehet használni. Amint azonban említettük,ez a vizsgálat csak vaginitisben szenvedő nők mintáival használható. NAATs gyorsan válnak elérhetővé, amelyek célja, hogy töltse ki ezt a vizsgálati rést, és biztosítja a fokozott érzékenység kapcsolódó NAATs., Ezek a vizsgálatok fontosak az STI ellenőrzési erőfeszítések és eltolja a jelenlegi paradigma, hogy ki tesztelték, és milyen beállításokat. Azoknál a nőknél, akiknél fertőzés jelei vagy tünetei vannak, ezek a vizsgálatok hasznosak lehetnek nagy érzékenységük és viszonylag gyors eredményeik miatt. Például, egy nő a kismedencei fájdalom, de nem hüvelyi folyás nem lenne jogosult a vizsgálat a megerősítés vizsgálat, de előnyös lehet A NAAT használat sürgősségi osztály (ED) vagy korrekciós létesítmény beállítás, ahol egy 60 – 90-min várni eredmények nem lenne ésszerűtlen.,

az egyik ilyen vizsgálat, amely 2015-ben megkapta az FDA jóváhagyását, az AmpliVue Trichomonas teszt (Quidel, San Diego, CA). Ez a vizsgálat izotermikus helikázfüggő amplifikációt (32) alkalmaz a Trichomonas DNS kimutatására laterális áramlású leolvasással. Egy kis, assay-specifikus analizátorra van szükség, és ezt a vizsgálatot CLIA mérsékelt szintű tesztnek nevezik. Az eredmények 1 órán belül elérhetők, és az érzékenység és a specificitás hasonló a kultúrához., Meg kell jegyezni, hogy a vizsgálat és a többi Naat összehasonlításával kapcsolatban nem állnak rendelkezésre publikációk, ezért a csomaglapon található érzékenységi adatokat, amelyeket a kevésbé érzékeny mikroszkópos és tenyésztési módszerekhez képest nyertek, potenciális túlbecsülésnek kell tekinteni. Sajnos ezt a vizsgálatot nem lehet ugyanazon a platformon a chlamydia/gonorrhoea teszteléssel együtt futtatni, ami némileg korlátozza annak alkalmazhatóságát számos beállításban.,

jelenleg az Xpert TV-vizsgálatot (Cepheid, Sunnyvale, CA) Az FDA még nem hagyta jóvá, de Európában CE-jelöléssel kapható, és várhatóan a közeljövőben elérhető lesz az Egyesült Államokban. Ez a vizsgálat egy eldobható patronban valós idejű PCR rendszert használ. A műszerek az egypatronos modultól a 80 patronos műszerekig terjednek. Az áteresztőképesség a műszerek mérete alapján változik, mindegyik patron körülbelül 60 percet igényel a trichomonas eredmények előállításához., Az Xpert rendszer előnye, hogy a platform menüje széles és rugalmas, mivel az összes vizsgálatot patronokon belül végzik. Így egy trichomonas patron futhat, miközben egy chlamydia / gonorrhoea patron fut a következő modulban. A menü túlnyúlik az STI-ken a kórokozók széles körére, így ez az eszköz ideális az alacsony átviteli sebesség beállításához, amelyek úgy döntenek, hogy nagyszámú tesztet egyetlen platformon konszolidálnak., Például egy ED használhatja ezt a rendszert, hogy STI-eredményeket hozzon létre egy olyan beteg számára, akinek szexuális egészséggel kapcsolatos panaszai vannak, miközben egyidejűleg meticillin-rezisztens Staphylococcus aureus-t és Clostridium difficile-t tesztelnek más betegek számára. Továbbá, ez a vizsgálat egy állítás Európában, és azt remélik, hogy az egyik az Egyesült Államokban a férfi vizelet, így ez az egyetlen platform, amelyen a vizsgálat lehet biztosítani a férfiak. Ez azért fontos, mert a Trichomonas fertőzésben szenvedő nők szexuális kapcsolatait mutató férfiak fertőzésének aránya 70% (16) volt.,

T. a vaginalis fertőzés évek óta nagyrészt figyelmen kívül hagyta az STI-t. Az elmúlt évtizedben azonban az epidemiológiai kutatások következetesen bizonyították az elkerülhető negatív egészségügyi eredményekkel való társulásokat. Noha az Egyesült Államokban a T. vaginalis nem szerepel a bejelentendő betegségek listájában, megalapozott (9), továbbra is szükség van a jobb vizsgálati lehetőségekre, különösen a nők számára., Számos beállítás, bár nincs ajánlás A CDC-től, amikor a chlamydia/gonorrhoea szűrését a prenatális egészségügyi ellátás első trimeszterében végzik, most hozzáadják a trichomonas fertőzés szűrését. Ezt a szűrést nagyrészt annak eredményeként adták hozzá, hogy egyetlen betegminta több tesztjét meg lehet rendelni. A szűrést alátámasztó adatok egyre erősebbek, mivel több kiváló minőségű tesztet alkalmaznak, és pontosabb adatokat generálnak (20)., Továbbá, a legtöbb szülészeti, nőgyógyászati és Családtervezési beállítások Az Egyesült Államokban, az arány a trichomonas fertőzés lényegesen magasabb, mint a gonorrhoea, és ha a szolgáltatók hozzáférhetnek az adatokhoz az adott betegpopulációk, ők nagyon érdekelt, hogy hozzáférjenek a vizsgálat.

a helyi tesztelést lehetővé tevő számos POC és alacsony szintű opció fejlesztés alatt áll. Azok, amelyek a legnagyobb hatással vannak a vizsgálatok, amelyek a lehetőséget, hogy fut chlamydia / gonorrhoea vizsgálat, nagy érzékenységű, és eredményeket gyorsan., Mint minden orvosi vizsgálat esetében, a költségek is kulcsszerepet játszanak a felvételben, de a piacon belüli verseny kiterjesztése elősegíti a költségek ésszerű fenntartását. A klinikai áramlási tervek, amelyek kihasználhatják a beteg által kapott mintákat és a rutin tesztrendelést, kihasználhatják a teszt-and-treat paradigmát egy rutin szexuális egészségügyi ellátáson vagy sürgős ellátáson belül., A trichomonas fertőzésben szenvedő nők szexuális partnerei számára végzett vizsgálatok rendelkezésre állása, ami fontos, tekintettel a Szexuális partnerségeken belüli magas fertőzési arányra (16), vagy az urethritis szenvedő férfiak valószínűleg növekedni fognak a keresletben, ha ezt a vizsgálatot a betegek közeli gyorstesztként lehet biztosítani. A szűrés olyan régiókban, mint például az Egyesült Államok délkeleti részén, ahol mind a trichomonas prevalenciája, mind a HIV előfordulási aránya a fekete nők körében a legmagasabb az országban, további eszközt jelenthet HIV-megelőzési eszköztárunkban (23)., Így a trichomonas tesztelés itt marad, és csak a jövőben fog gyakrabban használni, mivel a vizsgálathoz rendelkezésre álló tesztek továbbra is pontosak és kényelmesek mind a betegek, mind a szolgáltatók számára.