Etikai
a vizsgálatot megfelelően előírások a Helsinki Nyilatkozat (1964), valamint megfelel a Regionális Etikai Bizottság, Göteborgban.
kutyák
két kutyát használtak, Hanna, egy 10 éves fekete Óriás Schnauzer (chip no., 967000000389928), és Lotti, egy 6 éves fekete Óriás Schnauzer (chip szám: 098100311386). A tulajdonos és kezelő a GH. A kutyák családi háziállatként élnek a tulajdonossal és családjával. Az édesvízhez egész nap ingyenes hozzáférés áll rendelkezésre, naponta háromszor táplálkozik. A kutyák naponta több órát töltenek a kertben vagy a sétákon. Az egészségügyi ellenőrzéseket a Gustavsbergi Värmdö állatklinikán végzik.
képzés
a képzési módszert máshol részletesen ismertették . A jelen vizsgálatot megelőző 2 évben csak heti egyszeri karbantartási képzést alkalmaztak., Az edzések mindegyike 4-10 dobozt tartalmazott, amelyek közül 0-3 rákos szövetet vagy vért tartalmazott a petefészek-karcinómában szenvedő betegektől. A Beállítás véletlenszerűen lett kiválasztva minden munkamenet előtt. Ez a program lehetővé tette a kutyák számára, hogy minden edzés alkalmával más problémával szembesüljenek. A kutyákat csak a helyes azonosításért jutalmazták. A képzéshez a >500 U/ml CA-125 értékeket tartalmazó vérmintákat használtak petefészek-karcinóma indikátoraként. A képzési minta egy cseppjét egy kis műanyag edénybe helyezték minden dobozban., A vizsgálati időszakban használt vérmintákat nem használták fel a tesztekben. A kutyákat a kísérletben a göteborgi regionális etikai felülvizsgálati testület engedélyével használták, engedélyszám: S-220-08. A kutyák az edzés és a próbaidőszak alatt szabadon hozzáférhettek az édesvízhez. 2 órás munka után a kutyákat sétálták, vagy 20 perc szabadidejük volt.
Betegkiválasztás
a betegeket a klinikai és a bio-bank adatbázisok retrospektív vizsgálatába való felvétel céljából választották ki. Ez utóbbi petefészekrákos betegek vérét és rákos szöveteit tartalmazza., Az anyagot az egyes betegek engedélyének megszerzése után gyűjtötték össze, amelyet a Nyugat-svédországi petefészekrák kezelési programja szabályozott. A betegek kiválasztása először a klinika adatbázisából történt, majd az eredmények korreláltak a bio-bank adatbázissal a vérminták megszerzéséhez.
az összes vizsgálati betegre alkalmazott fő kiválasztási kritérium a klinikai teljes remisszió (CR) volt a hatodik (végleges) tervezett kemoterápiás kezelés előtt. Az I. sorozatra kiválasztott betegeket 3 csoportra osztották., A csoport tartalmazza a betegek 3 éves visszaesés-mentes túlélés, B Csoport tartalmazza a betegek, akik klasszikus számított 6 hónapon belül az utolsó kezelést; valamint a C Csoport tartalmazza a betegek, akik visszaesett 1-2 évvel a kezelés után. A 2001-2007-es években összesen 66, CR-ben szenvedő beteget választottak ki az 1. sorozatban. Mindegyik a göteborgi területről származott, és a bio-bank adatbázisában is szerepelt. Negyvenkét beteg vett mintát egy biobankból, amely megfelel az A, B vagy C csoportba való felvétel három másodlagos kiválasztási kritériumának., A II. sorozat kiválasztása kizárólag a biobank adatbázis segítségével történt.
vérmintákat
vérmintákat gyűjtöttek a Nyugat-svédországi Göteborg területén élő betegektől. A lakosság mintegy 600.000. A petefészekrák kezelésére szolgáló program két alkalommal CA-125 elemzést igényel. Először az elsődleges műtét előtt vagy közvetlenül után, a második pedig a kemoterápiás kezelés hatodik folyamata előtt. A petefészek-karcinóma kezelési programjában szokásos módon azonban a CA-125 szint nem szerepelt a nyomon követésben, bár az orvosoknak lehetőségük van ellenőrizni., A >500 U/ml CA-125 értékeket tartalmazó vérmintákat kutyaképzésre használták, egy cseppet minden doboz belsejében egy kis műanyag edénybe helyeztek. A vizsgálati időszakban használt vérmintákat nem használták fel a tesztekben.
referencia vérminták
a referenciacsoport anyagát a bio-bank adatbázisából választották ki. A klinikai kórszövettani változókat nem vették figyelembe, mivel korábbi vizsgálati eredményeink azt mutatták, hogy nem befolyásolják a kutyák észlelési érzékenységét ., Összesen 62 minták (42 a Sorozat, én pedig 20 a Sorozat II.), a különböző egyének, a CA-125 értékek >200 U/ml volt, véletlenszerűen kiválasztott referencia anyag Series i-II.
Teszt vérmintákat a Sorozat, én
Negyven-két mintákat gyűjtött, mint a vizsgált anyag Sorozat I. E vettek vérmintát, mielőtt a hatodik kemoterápia. A betegeket három csoportra osztották., Az A csoport 13 betegből állt, akiknél CR, 3 éves relapszusmentes túlélés és normális volt (<35 E/ml) CA-125 értékek az utolsó kezelési ciklusuk előtt. A B csoport 12, CR-ben szenvedő betegből állt, akik 6 hónapon belül visszaestek, és mindegyik, kivéve 2 (61 E/ml; <200 E/ml) volt CA-125 < 35ui. A C csoport 17, CR-ben szenvedő betegből állt, akik 1 és 2 év közötti recidíva és normál CA-125 értékek voltak. A tumorszövettan, a stádium és a fokozat a csoportokon belül változott.,
vérminták>500 U / ml CA-125 értékeket használtak edzésre, egy cseppet egy kis műanyag edénybe helyeztek minden dobozban. A vizsgálati időszakban használt vérmintákat nem használták fel a tesztekben.
teszt vérmintákat vettek a II. sorozat
mintáiból 3 és 6 hónappal a hatodik, utolsó kemoterápiás kezelés után. Sajnos nem tudtuk követni a betegeket az I. sorozatban, az a csoportban, mert egyiküknek sem volt vér a vérbankban. 10 másik beteg vérét gyűjtöttük össze, akiket rendszeresen követtek., A medián donor életkor 65 év volt (tartomány, 38-78 év).
kontroll vérmintákat
a Kontrollmintákat 2007 és 2009 között gyűjtötték, többnyire női egészségügyi személyzet önkénteseitől Göteborgban. A felvétel kritériuma az volt, hogy a betegek egészségesnek érezték magukat, nem voltak terhesek, és mentesek voltak a nőgyógyászati megbetegedésektől. A kontroll – és tesztanyagok nem voltak korhatárok. A fiatalabb személyeket tudatosan választották a kontrollminták forrásaként, hogy csökkentsék a petefészekrák tünetmentes jelenlétének kockázatát., Így mind a kontroll, mind a vizsgálati csoportok mintákat vettek a menopauza előtti és posztmenopauzális nőktől.
minta előkészítés
vérmintákat gyűjtöttünk EDTA csövekben, majd 3000 fordulat / perc sebességgel centrifugáltuk 10 percig plazma edényekkel a kis műanyag csövek felett. Centrifugálás után a plazmát két részre osztottuk, az egyik a CA-125 elemzéshez, a másik a későbbi kísérletekhez. Ez utóbbi részt -80°C-on tartották a tumorbankban (Etikai Bizottság engedélyszáma: S-220-08, regionális etikai felülvizsgálati testület Göteborgban)., A kontroll plazmaminták feldolgozása és tárolása azonos volt a célokkal. A kontroll vérrel ellátott csöveket azonban külön tárolták. A medián donor életkor 45 év volt (tartomány, 29-65 év).
Test design
a teszteket kettős vak módon végezték el, ahogy azt korábban leírtuk . Összefoglalva, mind a tesztvezetőt, mind a kezelőt elvakították a célminták helyére, és csak akkor voltak jelen a teszthelyen, amikor a kutyák dolgoztak. A kutyákat két sorozatban tesztelték. Az I. sorozat 4 napot (alkalmanként 2 napot), míg a II. sorozat 2 napot fedezett le., Minden nap tíz futást hajtottak végre, kivéve egy napot az I sorozatban, amikor 11 futást hajtottak végre. Minden futás hét dobozt tartalmazott, amelyek egymástól körülbelül 2 m-es körben helyezkednek el. Mindegyik doboz egy csepp plazmát tartalmazott; öt vezérlőanyagot tartalmazott, az egyik egy vizsgálati mintát, a másik pedig egy referenciamintát tartalmazott. A referenciaanyagokat az elsődleges művelet előtt vagy röviddel azután vették, így nagy koncentrációjú szagmolekulák voltak. A cél-és referenciadobozok elhelyezését egy asszisztens változtatta meg az egyes futások között. Minden dobozt alkohollal tisztítottak a futások között., A teszteket papíron és DVD-n dokumentálta a tesztvezető és egy asszisztens .
Kutya, válaszok
A pozitív válasz meghatározása, jelezve, hogy a cél mezőbe vakarja a mellső láb, fekve, valamint szippantja (nem jelzi a kontroll minták). A negatív válasz definíciója az volt, hogy szippantás, a vezérlő doboz megjelölése, és nem a cél megjelölése. A bizonytalan választ úgy határozták meg, hogy megállnak a doboznál, szagolják, karcolják, esetleg ugatnak, de egyenesen mennek, és nem fekszenek le.,
ovarium carcinomák kezelése
a Nyugat-svédországi standard kezelési programnak megfelelően a betegeket teljes hysterectomiával, kétoldalú salpingo-oophorectomiával, omentectomiával, több peritoneális biopsziával és peritoneális mosással kezelték citológiával. Körülbelül 4 héttel az elsődleges műtét után adták az első karboplatint, ciklofoszfamidot és epirubicint. Összesen hat tanfolyamot adtak be 4 hetes időközönként.,
statisztikai módszerek
a nyers adatokat érzékenységként foglaltuk össze (a kutya feltételes valószínűsége, hogy rákot jelez, amikor az állapot jelen volt) és a teszt specifikussága (annak feltételes valószínűsége, hogy a kutya figyelmen kívül hagyja az egészséges donor mintáját). Az érzékenység és a specifitás betekintést enged a kutyák általános osztályozási képességébe.
kiszámították azt a pozitív és negatív prediktív valószínűséget is, hogy a vizsgálat a helyes diagnózist adja. A pontbecsléseket 95% – os konfidenciaintervallumokkal számították ki ., Mind az érzékenységet, mind a specificitást arányokban fejezték ki, így az arányokra vonatkozó standard technikák alkalmazhatók statisztikai következtetésekre. A konfidenciaintervallumok a normál közelítésen alapultak, p ± 1,96 p 1 − p / n, ahol p a becsült érzékenység, a megfelelő specificitás és n A próbaüzemek száma.