les sujets de l’Étude
Les femmes ont été recrutées à partir d’une usine dans la communauté urbaine de Cuernavaca, à 89 km au sud de la Ville de Mexico., La concentration d’hémoglobine chez toutes les femmes de l’usine a été déterminée à partir d’échantillons de sang prélevés sur les doigts, suivis d’un échantillon de sang veineux pour déterminer la ferritine sérique chez les femmes non anémiques. Au total, 20 femmes non anémiques ayant de faibles réserves de fer ont été recrutées en fonction de la concentration d’hémoglobine 1 125 g/l et de la concentration sérique de ferritine <25 µg/l. les critères d’Exclusion comprenaient la grossesse et l’allaitement, les troubles gastro-intestinaux ou métaboliques (maladie inflammatoire de l’intestin, diarrhée chronique, fibrose kystique), , En tout, 20 nourrissons apparemment en bonne santé (âgés de 6 à 24 mois) et 20 enfants apparemment en bonne santé (âgés de 2 à 5 ans) ont été recrutés parmi des mères présentant des taux d’hémoglobine adéquats. Les sujets et les parents des enfants ont été pleinement informés des objectifs et des procédures de l’étude, et le consentement écrit a été obtenu. Le Comité D’éthique de L’Instituto Nacional de Salud Pública de Cuernavaca (Mexique) et de L’Ecole Polytechnique Fédérale de Zurich (Suisse) a examiné et approuvé le protocole.,
Taille de l’échantillon
Les calculs de la taille de l’échantillon étaient fondés sur les variations interindividuelles et intraindividuelles de l’absorption du fer observées dans des études antérieures sur la biodisponibilité du fer chez les nourrissons et les jeunes enfants (Davidsson et al., 1994, 1997, 2000, 2004). On a estimé que 20 enfants constitueraient une taille d’échantillon minimale pour détecter une différence significative de 50% dans l’absorption logarithmique moyenne du fer par rapport à une absorption arithmétique moyenne de base du fer de 7%, avec une puissance de 90%, un niveau de Signification de 0,05 (test T non apparié) et un taux d’erreur de type I de 5%., Anticipant un taux d’abandon de 10%, Ces estimations indiquaient qu’au moins 20 sujets de chaque groupe seraient nécessaires pour terminer les études.
plan de L’étude
Les femmes, les nourrissons et les enfants ont été assignés au hasard pour recevoir le repas d’essai soit avec du sulfate ferreux, soit avec du fumarate ferreux pendant des jours consécutifs. Le repas d’essai a été administré comme petit déjeuner après un jeûne d’une nuit. L’acceptabilité du repas d’essai a été confirmée avec chaque nourrisson et enfant avant l’inscription à l’étude. Aucun aliment ou boisson n’a été autorisé pendant 3 h après la prise complète du repas étiqueté., Les nourrissons et les enfants sont restés sous étroite surveillance pendant et après la prise du repas d’essai.
en tout, 5 ml de sang veineux ont été prélevés dans des tubes traités à L’EDTA juste avant la prise du premier repas d’essai et à nouveau 14 jours plus tard. Des échantillons de sang ont été analysés pour les indicateurs d’état du fer (hémoglobine et ferritine sérique) et la composition isotopique du fer. Le poids corporel et la taille ont été mesurés à chaque point de prélèvement sanguin.
test meal
le test meal était une boisson sucrée au lait de maïs à base de bouillie de farine de maïs mexicaine ‘atole’. Il a été fabriqué à partir de farine de maïs dégermée (24.,7%), du lait entier en poudre (11,7%), du piloncillo (une forme solide de cassonade non raffinée; 63,5%) et de l’eau purifiée (200 ml) sans ajout de fer ou d’acide ascorbique. Des repas d’essai normalisés ont été préparés spécialement pour l’étude à partir d’aliments disponibles localement achetés en vrac, à l’exception de la farine de maïs dégermée qui n’était pas disponible au Mexique et qui a été obtenue en Suisse (Swiss Mill, Zurich, Suisse). La farine de maïs dégermée a été utilisée pour minimiser la teneur en acide phytique de la farine, ce qui réduirait autrement la biodisponibilité du fer provenant de la farine d’essai (Hurrell et al., 2002)., Le repas d’essai a été cuit dans une cuisine et transporté chaud au centre d’alimentation de l’usine, où une portion de 220 g par femme et 60 g par nourrisson et enfant a été préparée comme petit-déjeuner et a été suivie de la prise d’eau. Tous les repas d’essai étaient identiques, à l’exception de l’ajout de 4 mg de Fe (femmes) ou de 2,5 mg de Fe (nourrissons et enfants) sous forme de fumarate ferreux ou de sulfate ferreux, qui ont été ajoutés au repas d’essai immédiatement avant de servir. La poudre de fumarate ferreux a été ajoutée directement dans le repas d’essai et du sulfate ferreux a été ajouté comme solution.,
étiquettes isotopiques stables
le fumarate ferreux marqué Isotopiquement a été produit par le Dr Paul Lohmann GmbH (Emmerthal, Allemagne) à partir de fer élémentaire enrichi en utilisant une procédure réduite de leur procédé de fabrication commercial équivalent. La même procédure a été utilisée pour des études antérieures (Davidsson et al., 2000, 2001, 2002; Fidler et coll., 2003; Sarker et coll., 2004). Les doses individuelles de fumarate ferreux ont été pré-pesées dans des tubes en polyéthylène, la quantité exacte ajoutée étant déterminée par le poids du tube, puis stockée., – du sulfate ferreux a été préparé à partir de fer élémentaire enrichi isotopiquement (Chemgas, Boulogne, France), qui a été dissous dans 0,1 mol H2SO4/l et constitué à la concentration appropriée. La solution a été conservée sous atmosphère d’argon dans une bouteille en polyéthylène jusqu’à ce qu’elle soit nécessaire et pesée en doses individuelles avant l’alimentation.,
la composition isotopique des deux étiquettes a été mesurée en trois exemplaires par spectrométrie de masse à ionisation thermique négative à l’aide d’un spectromètre de masse à champ de secteur magnétique (MAT262; Finnigan MAT, Brême, Allemagne) équipé d’un système multi-collecteur de tasses de Faraday pour la détection d’ions. La concentration en fer de chaque étiquette a été mesurée en trois exemplaires par analyse de dilution isotopique inverse (Walczyk, 1997). Le fumarate ferreux est dissous dans de l’acide nitrique concentré avant dilution isotopique., L’étalon de fer de composition isotopique naturelle a été préparé gravimétriquement à partir d’un matériau de référence isotopique (IRMM-014; Institut des matériaux et mesures de référence de L’UE, Geel, Belgique). Les rapports isotopiques ont été mesurés par spectrométrie de masse à ionisation thermique négative (Walczyk, 1997).
composition isotopique des échantillons de sang
des échantillons de sang total enrichi ont été minéralisés par digestion micro-ondes en utilisant un mélange de HNO3 et de H2O2 concentrés (30%) comme agents oxydants., Le fer a été séparé de la matrice par chromatographie d’échange d’anions et par une étape d’extraction liquide–liquide dans l’éther diéthylique (Walczyk et al., 1997). Des ébauches chimiques ont été traitées tout au long de la procédure. La composition isotopique du fer séparé a été mesurée par spectrométrie de masse à ionisation thermique négative.
État du fer
des échantillons de sang total fraîchement prélevés ont été aliquotés pour la mesure de la concentration en hémoglobine à l’aide d’un photomètre portatif HemoCue (Hemocue Inc., Angelholm, Suède) et des techniques standardisées., Le matériel de contrôle de la qualité correspondant a été analysé au début de chaque jour d’échantillonnage (Hemocue Inc., Angelholm, Suède). Une aliquote de sang total a été séparée pour les mesures de la ferritine sérique par immunoessai automatisé (Immulite One; DPC, Los Angeles, CA, USA) à L’ETH, Zurich, et le sang total restant a été congelé pour une analyse ultérieure de la composition isotopique.,
calcul de l’absorption du fer
Les quantités d’étiquettes isotopiques 57Fe et 58fe dans le sang, 14 jours après l’administration, ont été calculées en fonction du décalage des rapports isotopiques Fe et de la quantité estimée de fer circulant dans le corps. Les calculs étaient basés sur les principes de dilution isotopique, en tenant compte du fait que les étiquettes isotopiques du fer n’étaient pas mono-isotopiques. Le fer circulant a été calculé en fonction du volume sanguin et de la concentration en hémoglobine. Les calculs de volume sanguin étaient basés sur le poids corporel et la taille selon Brown et al. (1962) pour les femmes et Linderkamp et al., (1977) pour les enfants. Pour les calculs de l’absorption fractionnée du fer, on a supposé une incorporation de 80% du fer absorbé dans les érythrocytes chez les femmes (Hosein et al., 1967) et 90% pour les enfants (9). La VBR du fumarate ferreux a été calculée pour chaque ensemble de données.
analyse statistique
Les valeurs fractionnaires d’absorption du fer sont présentées sous forme de moyennes géométriques et de S. D. Tous les tests statistiques ont été alimentés à 80% et effectués avec un intervalle de confiance de 95% sur les données transformées en log, car les valeurs d’absorption du fer ne sont normalement pas distribuées., Le test T jumelé de Student a été utilisé pour comparer les données dans chaque groupe d’âge. La VBR du fumarate ferreux entre les groupes d’âge a été comparée à l’aide du test T non apparié de Student. L’analyse statistique de la puissance a été réalisée à l’aide d’un logiciel commercial (StatMate 2; GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). La régression linéaire a été utilisée pour évaluer la relation entre l’absorption du fer et les réserves de fer (représentées par la ferritine sérique) et la corrélation de Pearson a été utilisée pour examiner la relation entre la ferritine sérique et le RBV.