Ethics
Cette étude a été menée conformément aux règlements de la déclaration D’Helsinki (1964) et est conforme au Comité D’éthique régional de Göteborg.
chiens
deux chiens ont été utilisés, Hanna, un Schnauzer Géant noir de 10 ans (chip no., 967000000389928), et Lotti, un Schnauzer géant noir de 6 ans (puce no. 098100311386). Le propriétaire et le gestionnaire est GH. Les chiens vivent comme des animaux domestiques avec le propriétaire et sa famille. Il y a un accès gratuit à l’eau douce toute la journée et à l’alimentation trois fois par jour. Les chiens passent plusieurs heures chaque jour dans un jardin ou lors de promenades. Les contrôles de santé sont effectués à la clinique pour animaux Värmdö, Gustavsberg.
Formation
La méthode de formation a été décrite en détail ailleurs . Pendant les 2 années précédant la présente étude, une seule formation d’entretien par semaine a été utilisée., Chacune des séances de formation comprenait 4 à 10 boîtes , dont 0 à 3 contenaient du tissu cancéreux ou du sang de patients atteints de carcinome ovarien. La configuration a été sélectionnée au hasard avant chaque session. Ce programme a permis aux chiens d’être confrontés à un problème différent à résoudre à chaque occasion d’entraînement. Les chiens n’ont été récompensés que pour une identification correcte. Des échantillons de sang avec des valeurs de CA-125>500 U/ml comme indicateur de carcinome ovarien ont été utilisés pour l’entraînement. Une goutte de l’échantillon de formation a été placée dans un petit plat en plastique à l’intérieur de chaque boîte., Les échantillons de sang utilisés pendant la période d’entraînement n’ont pas été utilisés dans les tests. Les chiens ont été utilisés dans l’expérience avec la permission du Comité Régional D’examen éthique de Göteborg, numéro de licence: S-220-08. Les chiens avaient un accès gratuit à l’eau douce pendant les heures d’entraînement et de test. Après 2 heures de travail, les chiens ont été promenés ou ont eu 20 minutes de temps libre.
sélection des patients
Les Patients ont été sélectionnés pour être inclus dans cette étude rétrospective à partir des bases de données de la clinique et de la banque biologique. Ce dernier contient du sang et des tissus cancéreux de patients atteints de cancer de l’ovaire., Le matériel a été recueilli après avoir obtenu l’autorisation de la patiente et a été réglementé par le programme de traitement du cancer de l’ovaire dans L’ouest de la Suède. La sélection des patients a d’abord été faite à partir de la base de données de la clinique, puis les résultats ont été corrélés avec la base de données de la bio-banque pour obtenir des échantillons de sang.
le principal critère de sélection appliqué à tous les patients de l’étude était la rémission complète clinique (CR) avant la sixième (dernière) chimiothérapie programmée. Les Patients sélectionnés pour la série I ont été divisés en 3 groupes., Le groupe A comprenait les patients ayant une survie sans rechute de 3 ans, le groupe B comprenait les patients qui avaient rechuté dans les 6 mois suivant la dernière séance de traitement et, pour le Groupe C, les patients qui avaient rechuté entre 1 et 2 ans après le traitement. Au total, 66 patients atteints de CR au cours des années 2001-2007 ont été sélectionnés dans la série 1. Tous provenaient de la région de Göteborg et figuraient également dans la base de données de la bio-banque. Quarante-deux patients avaient des échantillons dans une biobanque correspondant à L’un des trois critères de sélection secondaires pour l’inclusion dans le Groupe A, B ou C., La sélection pour la série II a été faite à l’aide de la base de données de la biobanque uniquement.
échantillons de sang
des échantillons de sang ont été prélevés chez des patients vivant dans la région de Göteborg, dans l’ouest de la Suède. La population est d’environ 600 000 habitants. Le programme de traitement du cancer de l’ovaire nécessite une analyse CA-125 à deux reprises. Tout d’abord, avant ou directement après la chirurgie primaire, et la seconde avant le sixième cours de traitement de chimiothérapie. Cependant, comme d’habitude dans le programme de traitement du carcinome ovarien, le niveau de CA-125 n’a pas été inclus dans le suivi, bien que les médecins aient la possibilité de le vérifier., Des échantillons de sang avec des valeurs de CA-125>500 U/ml ont été utilisés pour l’entraînement des chiens, une goutte étant placée dans un petit plat en plastique à l’intérieur de chaque boîte. Les échantillons de sang utilisés pendant la période de formation n’ont pas été utilisés dans les tests.
échantillons sanguins de référence
Le matériel pour le groupe de référence a été sélectionné dans la base de données bio-bank. Les variables clinicopathologiques n’ont pas été prises en compte car les résultats de notre étude précédente ont montré qu’elles n’affectaient pas la sensibilité de détection des chiens ., Un total de 62 échantillons (42 pour la série I et 20 pour la série II), provenant de différents individus, avec des valeurs de CA-125 >200 U/ml ont été choisis au hasard comme matériau de référence dans les séries I et II.
échantillons de sang de test dans la série I
quarante-deux échantillons ont été prélevés et utilisés comme matériau de test dans la série I. ces échantillons de sang ont été prélevés avant le sixième traitement de chimiothérapie. Les Patients ont été divisés en trois groupes., Le groupe A était composé de 13 patients qui avaient une rc, une survie sans rechute de 3 ans et une valeur normale de CA-125 (<35 U/ml) avant leur dernier traitement. Le groupe B était composé de 12 patients qui avaient un CR, rechuté dans les 6 mois, et tous sauf 2 (61 U/ml; <200 U/ml) avaient CA-125 <35UI. Le groupe C était composé de 17 patients présentant un CR, une récidive entre 1 et 2 ans et des valeurs normales de CA-125. L’histopathologie tumorale, le stade et le grade variaient au sein des groupes.,
des échantillons de sang avec> 500 U/ml CA-125 ont été utilisés pour l’entraînement, une goutte étant placée dans un petit plat en plastique à l’intérieur de chaque boîte. Les échantillons de sang utilisés pendant la période de formation n’ont pas été utilisés dans les tests.
échantillons de sang de la série II
Les échantillons ont été prélevés 3 et 6 mois après le sixième et dernier traitement de chimiothérapie. Malheureusement, nous n’avons pas pu suivre les patients de la série I, Groupe A car aucun d’entre eux n’avait de sang dans la Banque de sang. Nous avons recueilli le sang de 10 autres patients qui ont été suivis régulièrement., L’âge médian du donneur était de 65 ans (intervalle, 38-78 ans).
échantillons sanguins témoins
des échantillons témoins ont été prélevés au cours des deux années 2007-2009, principalement auprès de femmes volontaires du personnel médical de Göteborg. Les critères d’Inclusion étaient que les patientes se sentaient en bonne santé, n’étaient pas enceintes et n’étaient pas atteintes de maladie gynécologique. Les matériaux de contrôle et d’essai n’étaient pas adaptés à l’âge. Les personnes plus jeunes ont été consciemment choisies comme source d’échantillons témoins pour réduire le risque de présence de cancer de l’ovaire asymptomatique., Ainsi, les groupes témoin et test avaient des échantillons de femmes pré et postménopausées.
préparation des échantillons
des échantillons de sang ont été prélevés dans des tubes EDTA, puis centrifugés à 3000 tr / min pendant 10 min avec des pots de plasma sur les petits tubes en plastique. Après centrifugation, le plasma a été divisé en deux parties, l’une pour l’analyse de CA-125 et l’autre pour des expériences ultérieures. Cette dernière partie a été conservée à -80°C dans la Banque de tumeurs (numéro de licence du Comité D’éthique: S-220-08, Comité Régional D’examen éthique à Göteborg)., Les échantillons de plasma témoin ont été traités et stockés à l’identique des cibles. Cependant, les tubes contenant du sang témoin ont été stockés séparément. L’âge médian du donneur était de 45 ans (intervalle, 29-65 ans).
plan D’essai
Les essais ont été effectués en double aveugle comme décrit précédemment . Pour résumer, le chef de test et le Gestionnaire ont été aveuglés à l’emplacement des échantillons cibles et n’étaient présents dans le lieu de test que lorsque les chiens travaillaient. Les chiens ont été testés en deux séries. La série I couvrait 4 jours (2 jours par occasion), tandis que la série II couvrait 2 jours., Dix courses ont été effectuées chaque jour, sauf une journée dans la série I où 11 courses ont été effectuées. Chaque course comprenait sept boîtes, placées en cercle à environ 2 m les unes des autres. Chaque boîte contenait une goutte de plasma; cinq contenaient des matériaux de contrôle, une contenait un échantillon d’essai et une contenait un échantillon de référence. Les matériaux de référence ont été pris avant, ou peu de temps après l’opération primaire, et avaient donc une forte concentration de molécules odorantes. L’emplacement des cases cible et référence a été modifié par un assistant entre chaque exécution. Chaque boîte a été nettoyée avec de l’alcool entre les courses., Les tests ont été documentés sur papier et DVD par le responsable du test et un assistant .
réponses du chien
une réponse positive a été définie comme indiquant la boîte cible en grattant avec la patte avant, en se couchant et en la reniflant (et non en indiquant les échantillons témoins). Une réponse négative a été définie comme reniflant et indiquant une boîte de contrôle et non indiquant la cible. Une réponse incertaine était définie comme s’arrêter à la boîte, la sentir, la gratter et éventuellement aboyer, mais continuer tout droit et ne pas se coucher.,
traitement des carcinomes ovariens
conformément au programme de traitement standard dans L’ouest de la Suède, les patients ont été traités par hystérectomie totale, salpingo-ovariectomie bilatérale, omentectomie, biopsies péritonéales multiples et lavages péritonéaux avec cytologie. Environ 4 semaines après la chirurgie primaire, la première association de carboplatine, cyclophosphamide et épirubicine a été administrée. Au total, six cours ont été administrés à intervalles de 4 semaines.,
méthodes statistiques
Les données brutes ont été résumées comme la sensibilité (la probabilité conditionnelle que le chien indique un cancer lorsque la maladie était présente) et la spécificité du test (la probabilité conditionnelle que le chien ignore un échantillon provenant d’un donneur sain). La sensibilité et la spécificité donnent un aperçu de la capacité de classification générale des chiens.
la probabilité prédictive positive et négative que le test donne le diagnostic correct a également été calculée. Les estimations ponctuelles ont été calculées avec des intervalles de confiance de 95%., La sensibilité et la spécificité ont été exprimées en proportions, de sorte que des techniques standard pour les proportions ont pu être appliquées pour l’inférence statistique. Les intervalles de confiance étaient basés sur l’approximation normale, p ± 1,96 p 1 − p / n où p est la sensibilité estimée, la spécificité respective et n est le nombre d’essais.