ORIGINAL RESEARCH
Serum b2-microglobulin values among healthy Brazilians using a DPC IMMULITE® assay
Valores de b2-microglobulina em brasileiros saudáveis usando o sistema automatizado DPC IMMULITE®
Fabíola Branco Filippin; Liliete Canes Souza
Department of Clinical Analysis, Science and Health Center, Federal University of Santa Catarina – Florianópolis/SC, Brazil. E-mail: [email protected].,BR
resumen
propósito: el presente estudio fue diseñado para determinar el rango normal de los niveles séricos de beta 2-microglobulina (Sb2M) entre voluntarios sanos en Brasil. Los niveles de Sb2M están elevados en pacientes infectados por el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) y se ha demostrado que son el mejor predictor del Estado de infección por VIH y de algunos trastornos malignos, especialmente el mieloma múltiple., Con el fin de lograr su uso óptimo en el diagnóstico clínico Brasileño, se realizó un estudio de intervalo de referencia adecuado para el ensayo SB2M IMMULITE®, basado en el hecho de que sus límites de rango de referencia fueron evaluados entre poblaciones europeas. métodos: se evaluaron noventa y seis donantes de sangre sanos y se midieron los niveles de Sb2M mediante inmunoensayo enzimático quimioluminiscente utilizando el analizador automatizado IMMULITE®. resultados: un rango normal de valores de Sb2M, establecido por un método estadístico no paramétrico, fue de 1,05 a 3,9 mg/mL, siendo el límite superior superior al reportado en otros lugares., conclusiones: este estudio presentó nuevos datos que indican que existe una diferencia significativa entre los límites de referencia actuales para el ensayo SB2M IMMULITE® y los encontrados en Brasil, proporcionando evidencia de que diferencias significativas en el rango de valores normales pueden ocurrir entre diferentes poblaciones, y que estos nuevos valores deben ser considerados para individuos Brasileños.
Palabras Clave: B2-microglobulina. Intervalo de referencia. Inmunoensayo quimioluminiscente. Voluntarios sanos. Valor pronóstico.,
resumen
OBJETIVO: el objetivo del presente estudio fue determinar los valores de referencia de B2-Microglobulina sérica (Sb2M) en voluntarios sanos. Se Sabe que tal parámetro se presenta elevado en pacientes infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) y se ha mostrado mejor marcador de la infección por HIV y de desórdenes malignos, especialmente mieloma múltiple., Para obtener el mejor diagnóstico clínico, se determinó un intervalo de referencia adecuado de Sb2M para la población brasileña empleándose el ensayo IMMULITE®; ya que éste tiene como parámetro un intervalo de referencia determinado a partir de poblaciones europeas.
MÉTODOS: Noventa y seis donantes de sangre sanos fueron evaluados y los valores de Sb2M fueron medidos por método enzima inmunoensayo quimiluminiscente usando Analizador automatizado IMMULITE®.
RESULTADOS: los valores de Sb2M, establecidos por método estadístico no paramétrico, se presentaron entre 1.05 y 3.,9 mg / ml, siendo que el límite superior obtenido fue mayor que el relatado en otros trabajos.
conclusión: este estudio presentó nuevos valores, indicando que existe una diferencia significativa entre los límites de referencia de Sb2M disponibles para el IMMULITE® y los encontrados en el presente trabajo, evidenciando la ocurrencia de variaciones importantes entre diferentes poblaciones y que nuevos valores deben ser considerados para brasileños.
Unitérmos: B2-microglobulina. Intervalo de referencia. Inmunoensayo quimiluminiscente. Voluntarios sanos. Valor pronóstico.,
Beta 2-microglobulina (B2M) una proteína que se encuentra en todas las células nucleadas, se asocia con antígenos de clase 1 de histocompatibilidad en las membranas de la superficie celular (particularmente abundantes en linfocitos y monocitos).1 se descubrió por primera vez en la orina de pacientes con insuficiencia renal.2 debido a su bajo peso molecular (11.800 daltons), el 95% de todo el b2M libre en plasma es eliminado por filtración glomerular, y el 99,9% del mismo es absorbido por células tubulares proximales. En presencia de una tasa de filtración renal normal, los niveles séricos elevados de B2M (Sb2M) indican una alta producción o liberación de b2m3., Tras la activación del sistema inmune, los linfocitos B y t liberan activamente b2M en circulación desde donde se elimina posteriormente a través de filtración glomerular y reabsorción tubular.4 se han encontrado concentraciones aumentadas de Sb2M en pacientes con discrasias de células sanguíneas, incluyendo mieloma multiple,5,6 trastornos linfoproliferativos malignos,7 trastornos mieloproliferativos,8 ciertas infecciones virales como infección por VIH, citomegalovirus, hepatitis no A y no B y mononucleosis infecciosa.,10 el nivel de Sb2M también se utiliza como factor pronóstico importante en pacientes con mieloma5,6 múltiple e infecciones por VIH.9
el rango de referencia normal para Sb2M en individuos sanos encontrado en la literatura se determinó utilizando poblaciones norteamericanas y europeas (ensayo DPC Immulite®). En un intento de determinar el rango normal de los niveles de Sb2M entre individuos africanos seronegativos asintomáticos, Piwowar et al. (1995) 10 encontraron que el 50% de estos sujetos tenían valores anormales (valores medios de 2,35 mg/mL). En otro estudio, el valor medio de Sb2M entre voluntarios sanos fue de 1,36 mg/mL.,11 en este informe, describimos los valores de Sb2M en sujetos brasileños sanos de un grupo de donantes de sangre del Centro de Hematología y Hemoterapia de Santa Catarina (HEMOSC).
sujetos
donantes de sangre, hombres y mujeres no embarazadas de 25 a 50 años de edad, fueron incluidos en el estudio. Todos los individuos fueron sometidos a una evaluación clínica evaluada por HEMOSC, incluyendo cuestionarios y pruebas de laboratorio de cribado según criterios legales Brasileños. Todos los voluntarios que cumplían estos criterios dieron su consentimiento verbal y escrito para que se les extraigan 5 mL adicionales de sangre para el propósito del estudio., El protocolo experimental fue aprobado por el Comité Ético del Hospital Universitario de Florianópolis, Universidad Federal de Santa Catarina.
métodos
se recolectó sangre completa con un sistema Vacutainer en tubos secos de 10 mL y se separó el suero por centrifugación. Con el fin de eliminar los componentes lipídicos, las muestras de suero se ultracentrifugaron a 18000 g durante 20 min. Todas las muestras de sangre se obtuvieron entre las 2:00 p. m.y las 6:00 p. m. y se procesaron dentro de las 5 h posteriores a la venopunción., Las muestras se predilutaron 1 en 41 en diluyente de muestra b2M (IMMULITE ® Beta-2 Microglobulin kit, DPC, USA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante, y se requirieron 5 mL para el procedimiento de ensayo. El Sb2M se midió mediante un inmunoensayo enzimático quimioluminiscente de fase sólida de 2 sitios utilizando el analizador automatizado IMMULITE® (DPC,Los Ángeles, EE.
análisis estadístico
en el estudio de rango de referencia para el ensayo DPC IMMULITE®, el valor promedio fue de 1,26 mg/mL., El Comité Nacional de estándares de Laboratorio Clínico (NCCLS) aborda el uso de criterios de exclusión a priori y a posteriori para obtener muestras sanas.12 por lo tanto, todos los sujetos con valores de Sb2M mayores de 2,0 mg/mL fueron reevaluados clínicamente para la aceptación de valores para asegurar que cada individuo estaba «sano». Los datos fueron introducidos y analizados con el Software Microsoft Excel. Se calcularon los valores de media y desviación estándar. Los rangos de referencia del percentil 95 se determinaron utilizando los percentiles 2,5 y 97,5., De acuerdo con el procedimiento recomendado por el NCCLS, las observaciones se clasificaron según el tamaño, y los percentiles 2.5 y 97.5 se obtuvieron como las observaciones ordenadas de 0.025 (n + 1) y 0.975 (n + 1) respectivamente (n= Tamaño de la muestra). Si los valores de rango Estimados no eran enteros, se llevó a cabo la interpolación lineal.12
resultados
noventa y seis donantes de sangre Brasileños, 60 hombres y 36 mujeres, con Edad Media (Año) de 33, fueron incluidos en el estudio. Los valores de Sb2M oscilaron entre 1,05 y 3,9 mg/mL, como se muestra en la Figura 1, y la media fue de 2,46 mg/mL (desviación estándar = 0,73)., Por lo tanto,utilizando el percentil 97,5 de acuerdo con un método rutinario no paramétrico, 12 3,9 mg/mL fue considerado el límite superior de la normalidad. El rango establecido fue de 1,33,9 mg/mL.
discusión
investigadores de todo el mundo han informado de la utilidad de Sb2M como fabricante confiable en la evaluación de la progresión de la infección por VIH y el mieloma múltiple.5-8, 10, 13 en los sujetos infectados por el VIH, la Sb2M parece ser un mejor predictor del Estado de infección por el VIH que los recuentos de CD4 y también un mejor predictor de la supervivencia, con un aumento de los niveles de Sb2M asociado con la progresión de la enfermedad.,10
se ha notificado un aumento de la producción y la consiguiente liberación de Sb2M en los fluidos corporales en pacientes con mieloma múltiple. La importancia de estos datos para los clínicos se basa en el hecho de que las células plasmáticas de mieloma producen Sb2M, por lo que se supone que los valores de Sb2M podrían indicar no solo el tamaño sino también la actividad proliferativa de las células de mieloma13 y podrían ser aceptados como un fabricante inespecífico de masa tumoral. 5,6,13,14 además, el papel pronóstico de Sb2M en otros trastornos proliferativos ha sido confirmado por muchos autores,7,14,15 facilitando la evaluación clínica.,15 por otro lado, se ha reportado que en pacientes con baja tasa de filtración glomerular, los niveles de Sb2M se elevaron y los hallazgos de laboratorio deben interpretarse con precaución.6,7,13
los intervalos de referencia se utilizan clínicamente, junto con información adicional, como guías sobre el estado del paciente. El estudio de rango de referencia para IMMULITE ® Sb2M (1.01.7 mg/mL, media de 1.26 mg/mL) definido por el fabricante se determinó utilizando muestras de suero de casi 800 voluntarios adultos, incluidos hombres y mujeres no embarazadas, de 20 a 70 años de edad., Los sujetos fueron seleccionados en base a cuestionarios. Se recogieron muestras en Francia, Alemania, Países Bajos y Portugal, y los valores obtenidos se analizaron de forma no paramétrica. El límite superior sugerido fue de 1,7 mg / mL. Estos valores pueden no ser representativos para los individuos Brasileños. Ante la ausencia de límites adecuados de rango de referencia para la Sb2M derivada de cualquier población brasileña, muchos investigadores han estado utilizando datos obtenidos de sujetos norteamericanos y europeos que presentaron límites superiores 2,3 veces menores que los obtenidos en el presente estudio.,
el NCCLS recomienda que se utilicen intervalos de referencia no paramétricos y que el tamaño muestral, n, conste de al menos 120 valores para calcular un intervalo de referencia del 95%, 2,5% y 97,5% puntos de la distribución12. Este número es el número mínimo de valores necesarios para la construcción de los intervalos de confianza que dan información sobre la exactitud de los límites de referencia calculados.
en este estudio se evaluaron 96 muestras., Nuestro objetivo no era producir nuevos intervalos de referencia, sino enfocarnos más en la necesidad de que cada laboratorio produzca sus propios intervalos de referencia para todos los parámetros a pesar de muchas dificultades, incluidas las prácticas y los altos gastos.
el presente estudio indica que rangos significativamente diferentes de valores de Sb2M pueden ocurrir entre diferentes poblaciones, lo que sugiere que cada laboratorio Brasileño debe establecer sus propios límites de referencia.,
agradecimientos
agradecemos al centro de Hematología y Hemoterapia de Santa Catarina y al laboratorio de Análisis Clínicos del Hospital Universitario de Florianópolis por las muestras y asistencia técnica. Agradecemos a DPC IMMULITE ® por proporcionar el reactivo establecido de forma gratuita para este estudio y a la Dra. Joanita del Moral de la División de hematología del Hospital Universitario de Florianópolis.
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12., National Committee for Clinical Laboratory Standards. Cómo definir y determinar los intervalos de referencia en el laboratorio clínico: guía aprobada, documento NCCLS C28-A y C28-A2, Villanova, PA, 1995, 2001, NCCLS.