ética
Este estudio se llevó a cabo de acuerdo con las regulaciones de la Declaración de Helsinki (1964) y se ajusta al Comité de Ética Regional, Gotemburgo.
perros
Se utilizaron dos perros, Hanna, un Schnauzer gigante negro de 10 años (chip no., 967000000389928), y Lotti, un Schnauzer gigante negro de 6 años (chip no. 098100311386). El propietario y manejador es GH. Los perros viven como mascotas familiares con el propietario y su familia. Hay acceso gratuito a agua dulce todo el día y alimentación tres veces al día. Los perros pasan varias horas al día en un jardín o en paseos. Los controles de salud se realizan en la Clínica de animales Värmdö, Gustavsberg.
formación
El método de formación se ha descrito en detalle en otra parte . Durante los 2 años anteriores al presente estudio, solo se utilizó un entrenamiento de mantenimiento semanal., Cada una de las sesiones de capacitación incluyó 4-10 cajas , de las cuales 0-3 contenían tejido canceroso o sangre de pacientes con carcinoma de ovario. La configuración se seleccionó aleatoriamente antes de cada sesión. Este programa permitió que los perros se enfrentaran a un problema diferente para resolver en cada ocasión de entrenamiento. Los perros fueron recompensados solo por una identificación correcta. Para el entrenamiento se utilizaron muestras de sangre con valores de CA-125 >500 U/ml como indicador de carcinoma de ovario. Una gota de la muestra de entrenamiento se colocó en un pequeño plato de plástico dentro de cada caja., Las muestras de sangre utilizadas durante el período de entrenamiento no fueron utilizadas en las pruebas. Los perros fueron utilizados en el experimento con el permiso de la Junta Regional de revisión ética en Gotemburgo, número de licencia: S-220-08. Los perros tenían acceso gratuito a agua dulce durante las horas de entrenamiento y pruebas. Después de 2 horas de trabajo, los perros fueron paseados o tuvieron 20 minutos de tiempo libre.
selección de pacientes
Los pacientes fueron seleccionados para su inclusión en este estudio retrospectivo de las bases de datos clínica y bio-bank. Este último contiene sangre y tejido canceroso de pacientes con cáncer de ovario., El Material se recogió después de obtener el permiso de la paciente individual y fue regulado por el programa de tratamiento para el cáncer de ovario en Suecia Occidental. La selección de los pacientes se realizó primero a partir de la base de datos de la clínica, luego los resultados se correlacionaron con la base de datos del bio-banco para obtener muestras de sangre.
el principal criterio de selección aplicado a todos los pacientes del estudio fue la remisión clínica completa (RC) antes del sexto (final) ciclo de quimioterapia programado. Los pacientes seleccionados para la serie I se dividieron en 3 grupos., El grupo a incluyó pacientes con 3 años de supervivencia sin recaída, el grupo B incluyó pacientes que habían recaído dentro de los 6 meses posteriores a la última sesión de tratamiento, y el Grupo C incluyó pacientes que habían recaído entre 1 y 2 años después del tratamiento. Un total de 66 pacientes con rc en los años 2001-2007 fueron seleccionados en la Serie 1. Todos eran de la zona de Gotemburgo y también estaban en la base de datos bio-bank. Cuarenta y dos pacientes tenían muestras en un biobanco correspondientes a uno de los tres criterios de selección secundarios para su inclusión en el grupo A, B O C., La selección para la Serie II se realizó utilizando únicamente la base de datos del Biobanco.
muestras de sangre
se recogieron muestras de sangre de pacientes que vivían en el área de Gotemburgo, en el oeste de Suecia. La población es de unos 600.000 habitantes. El programa de tratamiento para el cáncer de ovario en requiere análisis de CA-125 en dos ocasiones. Primero, antes o directamente después de la cirugía primaria, y el segundo antes del sexto ciclo de tratamiento de quimioterapia. Sin embargo, como es habitual en el programa de tratamiento del carcinoma de ovario, el nivel de CA-125 no se incluyó en el seguimiento, aunque los médicos tienen la opción de comprobarlo., Se utilizaron muestras de sangre con valores de CA-125 >500 U/ml para el entrenamiento del perro, colocándose una gota en un pequeño plato de plástico dentro de cada caja. Las muestras de sangre utilizadas durante el período de entrenamiento no fueron utilizadas en las pruebas.
muestras de sangre de referencia
El Material para el grupo de referencia fue seleccionado de la base de datos bio-bank. Las variables clinicopatológicas no fueron consideradas porque los resultados de nuestro estudio anterior mostraron que no afectaban la sensibilidad de detección de los perros ., Se seleccionaron al azar un total de 62 muestras (42 para la serie I y 20 para la Serie II), de diferentes individuos, con valores de CA-125 >200 U/ml como material de referencia en las Series I y II.
muestras de sangre de prueba en la serie I
se tomaron cuarenta y dos muestras que se utilizaron como material de prueba en la Serie I. estas muestras de sangre se tomaron antes del sexto ciclo de quimioterapia. Los pacientes se dividieron en tres grupos., El grupo A estaba formado por 13 pacientes con rc, supervivencia sin recaída a 3 años y valores normales de CA-125 (<35 U/ml) antes del último ciclo de tratamiento. El grupo B consistió en 12 pacientes que tuvieron una RC, recidivaron dentro de los 6 meses, y todos excepto 2 (61 U/ml; <200 U/ml) tuvieron CA-125 <35UI. El Grupo C estuvo compuesto por 17 pacientes con rc, recidiva entre 1 y 2 años y valores normales de CA-125. La histopatología del Tumor, el estadio y el grado variaron dentro de los grupos.,
para el entrenamiento se utilizaron muestras de sangre con valores de CA-125 > 500 U / ml, colocándose una gota en un pequeño plato de plástico dentro de cada caja. Las muestras de sangre utilizadas durante el período de entrenamiento no fueron utilizadas en las pruebas.
se tomaron muestras de sangre de la Serie II
3 y 6 meses después del sexto ciclo final de quimioterapia. Desafortunadamente, no pudimos seguir a los pacientes de la serie I, Grupo A Porque ninguno de ellos tenía sangre en el banco de sangre. Recolectamos sangre de otros 10 pacientes que fueron seguidos regularmente., La mediana de edad del donante fue de 65 años (rango, 38-78 años).
muestras de sangre de Control
Las muestras de Control fueron colectadas durante los 2 años entre 2007 y 2009, en su mayoría de mujeres voluntarias del personal médico en Gotemburgo. Los criterios de inclusión fueron que las pacientes se sintieran sanas, no estuvieran embarazadas y estuvieran libres de enfermedad ginecológica. Los materiales de Control y de prueba no fueron compatibles con la edad. Las personas más jóvenes fueron elegidas conscientemente como fuente de muestras de control para reducir el riesgo de la presencia de cáncer de ovario asintomático., Así, tanto el grupo control como el test tuvieron muestras de mujeres pre y postmenopáusicas.
preparación de la muestra
Las muestras de sangre fueron colectadas en tubos EDTA, y luego centrifugadas a 3000 rpm durante 10 min con macetas de plasma sobre los pequeños tubos de plástico. Después de la centrifugación, el plasma se dividió en dos partes, una para el análisis de CA-125 y la otra para experimentos posteriores. La última parte se mantuvo a -80 ° C En el banco de tumores (número de licencia del Comité Ético: S-220-08, Junta Regional de revisión ética en Gotemburgo)., Las muestras de plasma de Control se procesaron y almacenaron de forma idéntica a los objetivos. Sin embargo, los tubos con sangre de control se almacenaron por separado. La mediana de edad del donante fue de 45 años (rango, 29-65 años).
diseño de la prueba
Las pruebas se llevaron a cabo de manera doble ciego como se describió anteriormente . En resumen, tanto el líder de la prueba como el manejador estaban ciegos a la ubicación de las muestras objetivo, y estaban presentes en la ubicación de la prueba solo cuando los perros estaban trabajando. Los perros fueron probados en dos series. La serie I cubrió 4 días (2 días por ocasión), mientras que la Serie II cubrió 2 días., Diez carreras se realizaron en cada día, a excepción de un día en la serie I, cuando se llevaron a cabo 11 carreras. Cada carrera incluía siete cajas, colocadas en un círculo a unos 2 m de distancia una de la otra. Cada caja contenía una gota de plasma; cinco contenían materiales de control, uno contenía una muestra de prueba y uno contenía una muestra de referencia. Los materiales de referencia se tomaron antes, o poco después de la operación primaria, y por lo tanto tenían una alta concentración de moléculas de olor. La colocación de los cuadros de destino y referencia fue cambiada por un asistente entre cada ejecución. Cada caja se limpiaba con alcohol entre Corridas., Las pruebas fueron documentadas en papel y DVD por el líder de la prueba y un asistente .
respuestas del perro
una respuesta positiva se definió como la indicación de la caja de destino al rascarse con la pata delantera, acostarse y olfatearla (y no indicar las muestras de control). Una respuesta negativa fue definida como olfatear e indicar una caja de control y no indicar el objetivo. Una respuesta incierta se definió como detenerse en la caja, olerla, rascarla y posiblemente ladrar, pero seguir recto y no acostarse.,
tratamiento de los carcinomas de ovario
de acuerdo con el programa de tratamiento estándar en Suecia Occidental, las pacientes fueron tratadas con histerectomía total, salpingooforectomía bilateral, omentectomía, biopsias peritoneales múltiples y lavados peritoneales con citología. Aproximadamente 4 semanas después de la cirugía primaria se administró la primera combinación de carboplatino, ciclofosfamida y epirubicina. Se administraron un total de seis ciclos a intervalos de 4 semanas.,
métodos estadísticos
los datos brutos se resumieron como sensibilidad (la probabilidad condicional de que el perro indicara cáncer cuando la condición estaba presente) y especificidad de la prueba (la probabilidad condicional de que el perro ignorara una muestra de un donante sano). La sensibilidad y la especificidad dan una idea de la capacidad de clasificación general de los perros.
también se calculó la probabilidad predictiva positiva y negativa de que la prueba diera el diagnóstico correcto. Las estimaciones puntuales se calcularon con intervalos de confianza del 95%., Tanto la sensibilidad como la especificidad se expresaron como proporciones, por lo que las técnicas estándar para las proporciones podrían aplicarse para la inferencia estadística. Los intervalos de confianza se basaron en la aproximación normal, p ± 1,96 p 1-p / n donde p es la sensibilidad estimada, la especificidad respectiva y n es el número de tiradas de prueba.