Tabla 1
| Fragilidad Osmótica | Hemosiderina en Orina | Acidificada Suero de Prueba (Prueba de Ham) |
|---|---|---|
| Hemólisis con Sacarosa | Positivo | Positivo por la Hemólisis |
Hay Factores Que Podrían Afectar los Resultados de Laboratorio?, En particular, ¿su paciente toma algún medicamento (medicamentos de venta libre o herbales) que pueda afectar los resultados de laboratorio?
El uso del tubo de recolección incorrecto, por ejemplo EDTA, puede bloquear la activación del complemento y producir resultados falsos negativos en la prueba de lisis de sacarosa. La mayoría de los métodos ahora utilizan soluciones de sacarosa tamponada, ya que las soluciones de sacarosa no tamponadas también pueden producir resultados falsos negativos. El EDTA también puede bloquear la activación del complemento en la prueba de suero acidificado, produciendo un resultado falso negativo. Se requiere un ajuste preciso del pH al pH 6.78 +/- 0.1 para obtener resultados fiables., Puede ser necesario el uso de un laboratorio de referencia si la lisis de sacarosa y las pruebas de suero acidificado no son rutinarias en su institución. La hemosiderina en orina no tiene que ser intracelular para ser considerada positiva, dado que la orina normal debe ser negativa para gránulos de hemosiderina.
¿qué resultados de laboratorio son absolutamente confirmatorios?
Se dispone de un diagnóstico definitivo de HPN mediante citometría de flujo. Los pacientes con HPN tienen una disminución de la expresión de una proteína llamada proteínas de anclaje glicofosfatidilinositol (GPI) en los glóbulos rojos., En consecuencia, habrá disminución de la Unión de CD55 y CD59, que modulan la actividad del complemento y se unen principalmente a la superficie celular GPI. Tanto CD55 como CD59 se pueden disminuir en las superficies de los glóbulos rojos; sin embargo, dado que CD55 está más altamente expresado que CD59, es más probable que proporcione el resultado definitivo.
la citometría de flujo es muy sensible y puede medir pequeñas poblaciones celulares o clones afectados por la enfermedad (al nivel de 1-5%). También puede detectar la aparición de estos clones en pacientes con anemia aplásica o médula ósea hipoplásica., Como con la mayoría de la citometría de flujo, la sangre debe ser recolectada en tubos heparinizados y evaluada dentro de las 24 horas posteriores a la recolección para una prueba óptima.
¿Qué pruebas confirmatorias debo solicitar para mi Dx clínico? Además, ¿qué pruebas de seguimiento podrían ser útiles?
el gen responsable de la HPN es el gen fosfatidilinositolglycan A (PIG-A). Se encuentra en el cromosoma X. Las mutaciones somáticas asociadas a la HPN pueden ser muy variables. La mayoría de las mutaciones consisten en pequeñas eliminaciones o inserciones de pares de bases, pero también pueden ocurrir sustituciones de bases., Las mutaciones típicamente conducen a un cambio de marco del ADN y, en consecuencia, resultan en una reducción de la transcripción y traducción del producto proteico.
Las mutaciones también pueden ocurrir en múltiples ubicaciones dentro del gen PIG-A. Las mutaciones en la HPN asociada a anemia aplásica tienden a ser más grandes y/o más frecuentes en comparación con los pacientes con HPN solamente. Además de las proteínas moduladoras del complemento (CD55 y CD59), el GPI se une a muchas otras proteínas que pueden afectar de manera variable la estabilidad de la membrana y la activación del complemento., Uno de los problemas más desconcertantes en la identificación de la HPN es la variabilidad en la expresión de GPI, lo que resulta en pacientes que van desde la supresión leve a severa de la síntesis de GPI. El uso de la citometría de flujo para la detección de la Unión reducida a CD55 es una forma de resolver este mosaicismo o expresión. En última instancia, el gen de rutina y la secuenciación del genoma completo puede conducir a información importante sobre la HPN y su asociación con la anemia aplásica.
¿qué factores, si los hay, podrían afectar los resultados de laboratorio?, En particular, ¿su paciente toma algún medicamento (medicamentos de venta libre o herbales) que pueda afectar los resultados de laboratorio?
debido a la rareza de la HPN, muchos errores están relacionados con la prueba de HPN en pacientes que no han sido evaluados exhaustivamente para las etiologías más comunes de su presentación, ya sea enfermedad hemolítica crónica o anemia ferropénica. La mayoría de los errores resultan de este análisis clínico incompleto y ocurren en las primeras etapas de la revisión clínica., Todos los pacientes con apariencia de anemia por deficiencia de hierro, por ejemplo, deben ser revisados a fondo para determinar las fuentes de sangrado y evaluados utilizando el CBC estándar, diferencial y pruebas de detección para la anemia por deficiencia de hierro antes de continuar con la prueba de HPN., Del mismo modo, un paciente que presenta enfermedad hemolítica crónica debe ser revisado a fondo para transfusiones previas, hemólisis inducida por medicamentos y otras causas crónicas de hemólisis antes de realizar pruebas más específicas de HPN
dado que las pruebas de detección de HPN (prueba de lisis de sacarosa, prueba de Ham) se basan en materiales biológicos del paciente, en comparación con los glóbulos rojos normales, las pruebas de necesidad son menos precisas y son potencialmente menos sensibles cuando se realizan incorrectamente. Estos resultados son cualitativos y se basan en la inspección visual., Es importante evaluar adecuadamente la ausencia de hemólisis en los tubos de control, tanto en la prueba de lisis de sacarosa como en la prueba de Ham. Por lo tanto, vale la pena tener tales pruebas realizadas en un laboratorio de referencia con experiencia en la normalización de estas pruebas.
la citometría de flujo es probablemente la más precisa de las pruebas disponibles para la HPN; sin embargo, incluso la citometría de flujo tiene varios problemas. Un problema es la medición de la «ausencia» del marcador CD55. Probar resultados negativos es siempre una interpretación más difícil para el patólogo de citometría de flujo., Además, el hecho de que CD59 se exprese en niveles ocho veces menores que CD55 hace que CD59 sea un marcador de «respaldo» inadecuado para la HPN.