Undersøgelsen emner
kvinder blev rekrutteret fra en fabrik i bysamfund af Cuernavaca, 89 km syd for Mexico City., Hæmoglobinkoncentration hos alle kvinder i fabrikken blev bestemt ud fra fingerprik blodprøver efterfulgt af en venøs blodprøve for at bestemme serumferritin blandt ikke-anemiske kvinder. I alt 20 ikke-anæmiske kvinder med lave jerndepoter blev ansat, baseret på hæmoglobin koncentration ⩾125 g/l serum ferritin-koncentration <25 µg/l. Udelukkelseskriterierne i prisen graviditet og amning, mave-eller metaboliske forstyrrelser (inflammatoriske tarmsygdomme, kronisk diarré, cystisk fibrose), andre kroniske sygdomme, og de tager jerntilskud., I alt blev 20 tilsyneladende sunde spædbørn (i alderen 6-24 måneder) og 20 tilsyneladende sunde børn (i alderen 2-5 år) rekrutteret fra mødre med passende hæmoglobinniveauer. Fagene og børnenes forældre blev fuldt informeret om undersøgelsens mål og procedurer, og der blev opnået skriftligt samtykke. Den Etiske Komité på Instituto Nacional de Salud Pública, Cuernavaca, Mexico og Schweiziske Føderale Institut for Teknologi, Zürich, Schweiz gennemgået og godkendt protokol.,
prøvestørrelse
Prøvestørrelsesberegningerne var baseret på interindividuelle og intraindividuelle variationer i jernabsorption som observeret i tidligere undersøgelser af jern biotilgængelighed hos spædbørn og små børn (Davidsson et al., 1994, 1997, 2000, 2004). Det blev anslået, at 20 børn ville være en mindste stikprøvestørrelse for at registrere en 50% signifikant forskel i log betyde jernoptagelsen fra et aritmetisk gennemsnit baseline jern absorption af 7%, 90% effekt, et signifikans niveau på 0,05 (uparrede t-test) og en type i-fejl sats på 5%., Forud for en frafald på 10% indikerede disse estimater, at mindst 20 forsøgspersoner i hver gruppe ville være forpligtet til at afslutte undersøgelserne.
studiedesign
kvinder, spædbørn og børn blev tilfældigt tildelt til at modtage testmåltidet enten med ferrosulfat eller med ferrofumarat på hinanden følgende dage. Testmåltidet blev administreret som morgenmad efter en hurtig overnatning. Accept af testmåltidet blev bekræftet med hvert spædbarn og barn før tilmelding til undersøgelsen. Ingen mad eller drikke var tilladt i 3 timer efter fuldstændig indtagelse af det mærkede måltid., Spædbørn og børn forblev under nøje overvågning under og efter måltidets indtagelse.
i alt blev 5 ml venøst blod trukket ind i EDTA-behandlede rør lige før indtagelse af det første testmåltid og igen 14 dage senere. Blodprøver blev analyseret for jernstatusindikatorerne (hæmoglobin og serumferritin) og jernisotopsammensætning. Kropsvægt og højde blev målt ved hvert blodprøvetagningspunkt.
testmåltid
testmåltidet var en sødet majsmælkdrik baseret på den lokale me .icanske majsmelgrøddrik ‘atole’. Det var lavet af degermed majsmel (24.,7%), sødmælkspulver (11,7%),’ piloncillo ‘ (en fast form af uraffineret brunt sukker; 63,5%) og renset vand (200 ml) uden tilsat jern eller ascorbinsyre. Standardiserede test måltider blev tilberedt specielt til undersøgelsen ud fra lokalt tilgængelige fødevarer, der er købt i bulk, bortset fra den degermed majs mel, som var utilgængelig i Mexico og blev indhentet fra Schweiz (Swiss Mølle, Zürich, Schweiz). Degermed majsmel blev brugt til at minimere fytinsyreindholdet i melet, hvilket ellers ville reducere biotilgængeligheden af jern fra testmelet (Hurrell et al., 2002)., Testmåltidet blev kogt i et køkkenanlæg og transporteret varmt til fodringscentret på fabrikken, hvor en servering på 220 g pr.kvinde og 60 g pr. spædbarn og barn blev tilberedt som morgenmad og blev efterfulgt af indtagelse af vand. Alle test måltider var ens, bortset fra tilføjelsen af enten 4 mg Fe (kvinder) eller 2,5 mg Fe (spædbørn og børn), som enten -jernholdige fumarate eller -jernsulfat, som blev tilføjet til test måltid umiddelbart før servering. Ferrofumaratpulver blev tilsat direkte i testmelet, og ferrosulfat blev tilsat som en opløsning.,
Stabil isotop etiketter
Isotopically mærket -jernholdige fumarate blev produceret af Dr. Paul Lohmann GmbH (Emmerthal, Tyskland) fra beriget elementært jern ved hjælp af en nedskaleret procedure af deres tilsvarende kommercielle fremstillingsprocessen. Den samme procedure er blevet anvendt til tidligere undersøgelser (Davidsson et al ., 2000, 2001, 2002; Fidler et al., 2003; Sarker et al., 2004). Individuelle ferrofumaratdoser blev forvægtet i polyethylenrør, hvorved den nøjagtige tilsatte mængde blev bestemt ved rørvægt og derefter opbevaret., – jernsulfat blev fremstillet ud fra isotopisk beriget elementært jern (Chemgas, Boulogne, Frankrig), som blev opløst i 0,1 mol H2SO4/l og gjort op til den passende koncentration. Opløsningen blev holdt under argonatmosfære i en polyethylenflaske indtil det var nødvendigt og vejet i individuelle doser før fodring.,
Den isotopiske sammensætning af begge etiketter, der blev målt i tre eksemplarer af negativ termisk ionization mass spectrometry ved hjælp af en magnetisk sektor felt mass spectrometer (MAT262; Finnigan MÅTTEN, Bremen, Tyskland), der er udstyret med en multi-collector system af Faraday kopper til ion afsløring. Jernkoncentrationen af hver etiket blev målt i tre eksemplarer ved invers isotopfortyndingsanalyse (1997alc .yk, 1997). Ferrofumarat blev opløst i koncentreret salpetersyre før isotopfortynding., Jernstandarden for naturlig isotopsammensætning blev fremstillet gravimetrisk ud fra et isotopisk referencemateriale (IRMM-014; EU Institute of Reference Materials and Measurements, Geel, Belgien). Isotopforhold blev målt ved negativ termisk ioniseringsmassespektrometri (1997alc .yk, 1997).
Isotopiske sammensætning af blodprøver
Beriget hele-blodprøver, der blev mineraliseret med mikrobølgeovn fordøjelse ved hjælp af en blanding af koncentreret HNO3 og H2O2 (30%) som oxidationsmidler., Jern blev adskilt fra Matri theen ved anionbytningskromatografi og et væske–flydende ekstraktionstrin til diethylether (.alc .yk et al., 1997). Kemiske emner blev behandlet under hele proceduren. Isotopsammensætning af separeret jern blev målt ved negativ termisk ioniseringsmassespektrometri.
jernstatus
Frisktrukne helblodprøver blev alioteduoteret til måling af hæmoglobinkoncentration ved anvendelse af et bærbart Hæmocue-fotometer (Hemocue Inc., Angelholm, Sverige) og standardiserede teknikker., Tilsvarende kvalitetskontrolmateriale blev analyseret i begyndelsen af hver prøveudtagningsdag(Hemocue Inc ., Angelholm, Sverige). En alikvot af fuldblod blev adskilt til serumferritinmålinger ved automatiseret immunoassay (Immulite one; DPC, Los Angeles, CA, USA) ved ETH, .ichrich, og det resterende fuldblod blev frosset til senere analyse af isotopsammensætning.,
beregning af jernabsorption
mængderne af 57Fe og 58Fe isotopetiketter i blod, 14 dage efter administration, blev beregnet ud fra forskydningen af Fe isotopforhold og den estimerede mængde cirkulerende jern i kroppen. Beregningerne var baseret på principperne for isotopfortynding, under hensyntagen til, at jernisotopmærkningerne ikke var mono-isotopiske. Cirkulerende jern blev beregnet ud fra blodvolumen og hæmoglobinkoncentration. Blodvolumenberegninger var baseret på kropsvægt og højde ifølge bro .n et al. (1962) for kvinder og Linderkamp et al., (1977) for børn. Til beregninger af fraktioneret jernabsorption blev 80% inkorporering af det absorberede jern i erytrocytter antaget for kvinder (Hosein et al., 1967) og 90% for børnene (9). RBV af ferrofumarat blev beregnet for hvert datasæt.
Statistisk analyse
Fraktioneret jern absorption værdier er præsenteret som geometrisk betyder, og s.d. Alle statistiske analyser blev drevet på 80% og udført med 95% konfidensinterval på de log-transformerede data, som jernoptagelsen værdier er ikke normalt fordelt., Studentens parrede t-test blev brugt til at sammenligne dataene inden for hver aldersgruppe. RBV af ferrofumarat mellem aldersgrupper blev sammenlignet ved hjælp af studentens uparrede t-test. Statistiske power analyse blev udført ved hjælp af kommerciel software (StatMate 2; GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA). Lineær regression blev brugt til at evaluere forholdet mellem jernabsorption og jerndepoter (repræsenteret ved serumferritin), og Pearsons korrelation blev brugt til at undersøge forholdet mellem serumferritin og RBV.